烟草表达粉尘螨ⅰ类变应原及其免疫治疗研究

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1、中图分类号：塑鲢：生学科分类号：—100—103论文编号：安徽理工大学硕士学位论文烟草表达粉尘螨1类变应原及其免疫治疗研究作者姓名：石蓬专业名称：疸厘生物堂研究方向：痘厦生物皇盆王鱼瘗堂导师姓名：奎塑昌麴攫导师单位：室筮理王太堂医堂院答辩委员会主席：互盔[_乒釜一论文答辩日期：2012年5月25日安徽理工大学研究生处年月日A·DissertationinPathogenBiologyTheexpressionofallergengroup1fromDermatophagoidesfarinaeintobaccoanditsimmunotherapyresearchCandidate

2、：ShiLianSupervisor：LiChaopinMedicalSch001AnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo·168，ShungengRoad，Huainan，232001,P．R．CHINA独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方以外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塞徵理王太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者张丝吼必

3、』月亏日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塞徵垄王太堂有保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于塞筮垄三太堂。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽理工大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：孑芎≥L导师签名：船签字日期：焖≯签字日期：沙印啤了月7日摘要目的构建粉尘螨I类变应原(Derfl)瞬时表达载体TRBO-Derfl，观察其在烟草中的表达并探讨烟草表

4、达的Derf1疫苗免疫治疗过敏性哮喘的疗效。方法1．重组质粒TRBO-Derfl的构建及在烟草叶片中的表达以粉尘螨总RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增DerfJ基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO，转化根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)GV3101株后，抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。将含TRBO-Derf』重组质粒的GV3101注射本氏烟叶片，SDS—PAGE电泳检测注射3、4、5、6天后Derf1的表达。2．烟草表达的粉尘螨I类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究100只BALB／c小鼠随机分为5组，分别为PBS组即阴性对照组，阳性对照卵白蛋白(

5、OVA)组，原核表达Derf1(pDerf1)组，烟草表达Derf1(tDerf1)组，烟草表达蛋白免疫治疗组(tDerf1一T)，PBS组用PBS，其余4组分别用OVA、pDerfl、tDerfl、tDerfl致敏激发BALB／c小鼠，于0、7、14天腹腔注射致敏，第21天雾化吸入激发，连续7天，24h后，各组小鼠引颈处死；保留tDerf1．T组继续用tDerfl免疫治疗；通过肺组织病理切片观察小鼠肺部炎症；收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞及分类计数；ELISA法检测BALF、脾细胞培养上清(SCCS)的特异性细胞因子IL．2、IL．4、IL一5、IL．17和口附吖和血

6、清中变应原特异性IgE、IgGl抗体浓度。结果1．重组质粒TRBO-Derfl的构建及在烟草叶片中的表达电泳及测序表明Derfl基因克隆成功，大小为627bp。经PCR及酶切反应证实重组质粒TRBO-Derfl成功转入根癌农杆菌。SDS．PAGE电泳检测表明，该蛋白于第5和6天在烟草叶片中高表达。2．烟草表达的粉尘螨I类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究烟草表达蛋白免疫治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻；BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、IL一4、IL一5、IL一17、血清抗原特异性IgE抗体和脾细胞分泌IL．4、IL．5、IL—17均低于阳性对照组；BAL

7、F和SCCS中IL一2、IFN-7含量均高于阳性对照组。结论构建的瞬时表达重组载体TRBO-Derfl成功表达于烟草叶片，为进一步研究粉尘螨植物疫苗奠定了基础：烟草表达的粉尘螨I类变应原疫苗免疫治疗可抑摘要制小鼠肺部过敏性炎症。图[8]表[7]参考文献[75]关键词粉尘螨；瞬时表达；重组蛋白；哮喘：烟草；免疫治疗；小鼠中图分类号：R384．4摘要AbstractObjective：ToconstructthetransgenicrecombinantvectorofT