日本血吸虫感染小鼠结肠黏膜内虫卵死活鉴别及抗原检测的研究

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1、分类号≤!竺uDc鱼!Q睦密级编号中南大学CENTRALSoUTHUNIVERSITY硕士学位论文日本血吸虫感染小鼠结肠黏膜内论文题目：虫卵死活鉴别及抗原检测的研究学科、专业：研究生：指导教师：临床医学薛伟世李闻文教授中南大学二零一二年五月一苓一一，牛血月硕士学位论文日本血吸虫感染小鼠结肠黏膜内虫卵死活鉴别及抗原检测的研究髓鼢袖0fIde：舳of舭E醉D训0rA肌whichⅥ饿elar剐删n砌n炝CO的叫吣mUCOSa0重Ⅳ蛾ⅡlKjc删WImJl●●』■门l●一lI●●●●'●J■&砌鳓粥讲妲砌弘砌碗嬲andA删gendete

2、c妇作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：论文答辩日期2Q12二5=!墨薛伟世临床医学医学检验系李闻文教授曾庆仁教授中南大学2012年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。儡钐芝作者签名：篚盗世日期：盟年尘月堕日学位论文版权使用授权书本人了解中

3、南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。獭作者签名：篚篮世导师签名奎闻塞日期：2Q12年』月上王日硕士学位论文摘要第一章甜虫卵内抗氧化酶检测及用于鉴别虫卵死活的研究【目的】检测日本血吸虫(跚)不同发育程度虫卵内抗氧化酶水平，分析其是否可作为判别宿主体内血

4、吸虫卵死与活的标志物。【方法】采用3，3一二甲基联苯胺盐酸盐(DAB)+H：O：的底物系统作为抗氧化酶检测方法对完整跖虫卵进行染色观察，并探索其染色条件。建立跖感染后第50d和90d有活虫体寄生的小鼠模型与其治后30d和90d无活虫的小鼠模型。用抗氧化酶染色最佳条件对各模型组小鼠肝肠组织分离出的游离虫卵作生化检测，比较观察其对未成熟卵、成熟卵、近期变性卵和远期变性卵的染色结果，并依据其显色程度与其分布情况评价抗氧化酶水平，分析其用于判别町虫卵死与活的可能性。用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX、)、过氧化

5、物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒测定分析虫卵内抗氧化酶类型及其水平。【结果】与未做染色的虫卵比，DAB底物系统加入完整游离活卵中经室温震动反应30min时，所呈现的深棕黄色的阳性反差最明显；DAB底物系统加入经100℃水浴处理30min完整游离活卵作检测时，未见呈显色反应；用DAB底物系统对跖感染50d、90d及治后30d和90d的模型鼠肝肠来源虫卵染色的阳性率分别为92．34％、46．03％、13．68％和O．oo％。阳性反应程度分析显示：未成熟虫卵普遍呈深棕黄色；成熟卵多呈深黄色，分布于毛蚴体部；近期变性卵

6、中部分有显色反应，且多为未成熟卵；远期变性卵和卵壳均无显色反应。SOD、GSH—PX、PoD和CAT校正浓度的各自构成比在未成熟中分别为64．1％、28．4％、3．6％和3．9％，在成熟虫卵中分别为72．7％、21．8％、2．O％和3．6％。【结论】证明町活虫卵内均富含抗氧化酶成分，且以SOD和GSH—PX抗氧化酶类为主。在未成熟卵中含量高，且随着虫卵发育成熟至死亡而逐渐减低，并可作为鉴别游离跖完整虫卵死与活的标志物。【关键词】日本血吸虫，虫卵，抗氧化酶，DAB染色，虫卵死活鉴别I本研究受到中央高校基金前沿研究计划重点项目经费(

7、至Q!QQ三圣殴至!)资助硕士学位论文摘要第二章甜感染鼠结肠黏膜内虫卵游离的方法探索【目的】探索游离组织内虫卵的方法，改善活检组织内虫卵做抗氧化酶染色鉴别其死活的效果。【方法】采用压片、剪切、超声、化学(5％NaoH)消化、酶(O．5％胰蛋白酶和l％胃蛋白酶)消化共6种方法对小鼠肠黏膜模拟活检组织进行处理，观察虫卵游离出组织及用DAB染色的效果。【结果】在6种处理方法中，可使虫卵较好地游离出组织和获得较理想抗氧化酶染色效果的是胰蛋白酶消化法。压片和剪切法对虫卵游离效果差。超声法可使部分虫卵破裂和丢失。Na0H和胃蛋白酶二者消化法

8、主要影响抗氧化酶染色效果。【结论】胰蛋白酶消化法可使肠黏膜内大部分虫卵游离，并获得良好的抗氧化酶染色效果，但仍需进一步解决全部虫卵游离出组织的问题。【关键词】日本血吸虫卵，抗氧化酶，DAB染色，胰蛋白酶第三章甜感染鼠结肠黏膜内虫卵分泌抗原检测的研究【目的】检测感