日本血吸虫虫卵及相关抗原的研究

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1、密级：论文编勺.中囯农业科学院学位论文日本血吸虫虫卵及相关抗原的研究ResearchofSchistosomajaponicumeggsandassociatedantigens硕士研究生：赵登云指导教师：朱传刚副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而

2、使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：时间：年6月丨曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：4时间：>w_T年f月1日导师签名；本枝叫.时间：w/jf年6月v日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表

3、论文题目日本血吸虫虫卵及相关抗原的研究论文作者赵登云专业领域兽医研究方向不区分研究方向指导教师朱传刚培养单位(研究所、中心）7^>、，U姓名职称单位专I_涂亚斌副研究员哈尔滨兽医研究所兽医X评阅刘宗平教授扬州大学兽医/人答辩程训佳教授复旦大学预防兽医学主%席朱建国教授上海交通大学预防兽医学刘金明研究员上海兽医研究所预防兽医学答陈兆国研究员上海兽医研究所预防兽医学辩苑纯秀副研究员上海兽医研究所预防兽医学a委员会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月27日，上海兽医研究所密级:论文编号:中国农业科学院学位论文日本血吸虫虫卵

4、及相关抗原的研究ResearchofSchistosomajaponicumeggsandassociatedantigens硕士研究生：赵登云指导教师：朱传刚副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationResearchofSchistosomajaponicumeggsandassociatedantigensM.S.Candidate：DengyunZhaoSu

5、pervisor：AssociateProf.ChuangangZhuDegree：MasterofVeterinaryScienceSpecialty:VeterinaryMedicineMay2015摘要血吸虫病是人畜共患寄生虫病。血吸虫感染的实验诊断在血吸虫病防治中发挥重要作用，目前血吸虫虫卵依然是主要的血吸虫病诊断抗原，对血吸虫虫卵的提取、虫卵可溶性抗原（SEA）的认识依然不足。本课题目的是建立一种快速提取纯净虫卵的方法；检测用该法提取虫卵制备SEA作为血吸虫病检测抗原的可行性；然后采用免疫亲和层析的方法收集与血吸虫病Ig

6、G发生特异性结合的SEA组分并进行鉴定和分析；最后从鉴定的抗原组分中选取一种抗原进行基因的克隆表达，检测其作为诊断抗原的价值。用不同浓度的NaOH、在不同温度、用不同时间消化含有虫卵的肝脏匀浆液，以确定虫卵提取最佳条件；用方阵实验确定以此法提取的SEA最佳抗原包被浓度并采用ELISA法检测现场获得的75份血吸虫阳性、60份血吸虫阴性水牛血清，以评价抗原的检测效果；最终用该SEA组分试制了日本血吸虫血清检测的间接血凝试剂。结果表明NaOH消蚀法提取组织中虫卵的最佳条件为：NaOH浓度为5%~10%，反应温度为45℃，反应时间为5-1

7、0min；该法制备的虫卵纯净度高，得率为常规法的3倍以上；NaOH消蚀法提取抗原的检测灵敏度比过筛提取虫卵所得抗原显著性提高（p<0.05）；用消蚀法提取虫卵抗原检测水牛血清其灵敏性为93%，过筛法为88%，特异性为100%，过筛法为97%（P>0.05）。所试制的间接血凝试剂对于检测兔、鼠血清具有较好的效果。为进一步从SEA获得具有诊断价值的主要抗原信息，从血吸虫病阳性鼠血清纯化得到IgG，并将其固化到树脂上；通过免疫亲和层析的方法收集与IgG发生特异性结合的SEA抗原组分并进行质谱鉴定、糖蛋白和生物信息学分析。结果显示：阳性B

8、ALB/c鼠血清中纯化的IgG通过免疫亲和层析收集SEA的组分保持了抗原性；质谱共鉴定到76个蛋白群的262个蛋白质；主要参与血吸虫的代谢过程、生物调节、应激反应等；这些蛋白具有结合及催化活性、电子载体活性、酶调节活性等相关功能；Dot-blot/