六价铬对大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏的影响分析

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1、硕士毕业论文中文摘要六价铬对大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏的影响研究中文摘要目的：确定适用于线粒体功能活性试验研究的线粒体提取方法，并初步探索Cr(VI)诱导大鼠肝细胞线粒体呼吸链电子漏增加的机制，为阐明Cr(VI)诱导肝细胞氧化损伤的机制提供线索。方法：分别用蔗糖法和试剂盒法提取大鼠肝细胞线粒体，用OPTEC光学显微镜和H．600透射电子显微镜观察线粒体形态结构和超微结构。用960MC荧光分光光度计和Clark氧电极测定线粒体提取0．5h、1．5h和2．5h后的线粒体膜电位，ST3，ST4及呼吸控制

2、率。用SP．756P可见分光光度计测定线粒体及其他亚细胞器特异性标志酶的酶比活性。分别以谷氨酸／苹果酸和琥珀酸为呼吸底物，启动线粒体主呼吸链和次呼吸链的电子传递。测定不同浓度的Cr(VI)对肝细胞线粒体呼吸链ROS生成量的影响。用Clark氧电极测定肝细胞线粒体主呼吸链和次呼吸链的基础呼吸速率。线粒体悬液用Cr(VI)，GSH和各种复合体抑制剂处理。其中，线粒体主呼吸链电子传递用Rot，DPI和Ant单独或联合处理，而线粒体次呼吸链电子传递用Rot，DPI，TTFA和Ant单独或联合处理。用Vari

3、oskanFlash4．00．52多功能酶标仪分别测定各组线粒体主呼吸链和次呼吸链02。-和ROS的生成量。结果：1．蔗糖法提取的线粒体膜电位和呼吸控制率显著高于试剂盒法，差异有统计学意义(户O．05)。两种方法提取的线粒体超微结构均完整，未见肿胀或损伤，但试剂盒法提取的线粒体纯度较差，可见大量泡状体。2．Cr(VI)在O．100uM的浓度范围内，能诱导肝细胞线粒体主呼吸链和次呼吸链ROS的生成量随着Cr(VI)浓度的增加而增加，

4、差异有统计学意义(尸

5、t组的ROS含量和电子漏增加，Cr(VI)+DPI组ROS含量增加(尸

6、尸>O．05)。Cr(VI)+TTFA组和Cr(VI)+Rot+TTFA组，Cr(V／)+Ant组，Cr(VI)+Rot+Ant组，Cr(WI)+DPI+Ant组和Cr(V1)+1]陌A+Ant组ROS生成量和电子漏增加，Cr(VI)+DPI+TTFA组减少(尸

7、合位点漏出。对于次呼吸链，50uMCr(VI)诱导肝细胞线粒体电子漏增加的机制是通过当电子沿着次呼吸链正向传递到复合体III时，在复合体III的泛醌结合位点漏出，电子漏增加，而导致线粒体氧化损伤。3．200uMGSH通过有效清除肝细胞线粒体内过量生成的H202，减少总ROS含量，对50uMCr(VI)诱导肝细胞线粒体呼吸链电子漏增加所致的氧化损伤有显著的保护作用。关键词：肝细胞，线粒体，质量评价，电子漏IIprovidecluesforthefurtherresearchinmechanismofC

8、r(VI)inducedhepatocyteoxidativedamage．Methods：Theintactmitochondriawereisolatedfromratlivertissuesbysucrosegradientcentrifugationandcommerciallyavailablekit．basedmethods．Mitochondrialmorphologyandultra．structurewereobservedbvOPTEClightm