芍药苷对k562细胞增殖的抑制作用及其机制研究

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1、芍药昔对K562细胞增殖的抑制作用及其机制研究辛春雷1李军1王志效2(1山东省济宁市第一人民医院272100；2济宁市中心血站272100)【中图分类号】R285【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)46-0200-02【摘要】目的探讨芍药昔对K562细胞生长抑制作用及其对细胞周期的影响。方法釆用MTT法测定芍药昔对K562细胞的体外抑制作用，免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白bcl・2,流式细胞仪测定细胞周期。结果芍药昔对K562细胞有抑制作用，可下调凋亡相关蛋白bcl-2的表达，阻止细胞周期于G1/S期。结论芍药昔可明显抑制k562细胞牛

2、长，阻止细胞周期。【关键词】芍药昔K562细胞细胞周期bcl-2目前治疗血液恶性肿瘤的现代治疗技术在挽救患者牛命，延长牛存期等方面使患者获益匪浅。但同样放化疗的毒副作用，干细胞移植后牛活质量的降低,使病人不能走向社会，也是需要解决的问题。中医药是一大宝库，许多中药对人体机能具有双向调节性，有多层次、多环节、多靶点的生物学效应。芍药昔是从中药白芍提取的物质，近年研究芍药昔(paeoniflorin)具有抗炎、免疫调节、保肝、镇静等作用[1-3]o1材料与方法1.1实验仪器与试剂酶标仪；流式细胞仪；C02孵箱。芍药昔；MTT；胎牛血清；DAB显色试剂盒；细胞免疫

3、化学染色试剂盒SP-20002；bcl-2单抗。1.2细胞系与细胞培养K562常规培养传代细胞，用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，在37°C、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。1.3体外药效学试验一细胞活性检测(MTT)取对数牛长期的K562细胞，传代接种于96孔板，每孔180μl（l×105/孔），设置对照组（不加药）、空白组（只有培养基，无细胞）和5种浓度药物组（0.1、1>10、100、1000μg•ml-l）,共分7组，每组设3个平行孔。在°、12、24、36、48、72h六个吋间点，选择492nm波长在

4、酶标仪上测各孔OD值，按下式计算细胞抑制率:IR%=（A对照一A实验）/A对照×100%o1.4免疫细胞化学法检测bcl-2表达用三个不同浓度的芍药昔（10μg•ml-l>20μg•ml-l、40μg•ml-l）处理细胞24小时,收集细胞,离心洗涤，丙酮固定，空气干燥；加3%过氧化氢去离子水处理标本lOmin；加山羊血清工作液50µl封闭，孵育；加一抗，37°C孵育2〜3h；加生物素标记的第二抗体50µl,孵育10〜15min；加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液50&mi

5、cro;l,孵育10~15min；加DAB溶液50µl,显色3〜5min,显微镜下观察；如必要苏木素复染、1%盐酸酒精分化、1%氨水返蓝；乙醇逐级脱水、二甲苯透明、中性树胶封片，显微镜下观察。1.5芍药卄对K562细胞周期的影响用两个不同浓度的芍药昔（10μg•ml・l、20μg•ml-l）处理细胞12小吋，将K562细胞用PBS洗涤，用20μg•ml-l的碘化丙卩定（PI）溶液10μl在低温下染色20分钟,立即FCM检测。1.6统计学处理采用统计软件SAS6.12进行分析，数据以均值&plu

6、smn;标准差表示，样本均数的比较用t检验。2结果2.1细胞活性检测（MTT）芍药昔在浓度为20μg•ml-l吋可出现细胞生长现象，口随吋间的延长生长抑制越明显，具有时效关系（图1）。图1芍药背与K562细胞共同孵育不同吋间的细胞生长曲线2.2流式细胞仪检测K562细胞周期芍药昔作用K562细胞12小吋检测细胞周期，结果显示阻止细胞周期于G1/S期(表1)。表1芍药昔对K562细胞周期的影响分组浓度(ug•ml-l)Gl前期G0/G1期S期G2/M期对照组一2.6040.2327.2517.32药物组105.8416.12*30.5

7、6*35.29*2022.5112.35*28.41**27.35*与对照组比较*P<0.01,**P<0.052.3芍药昔对K562细胞bcl-2表达的影响K562细胞bcl・2呈强阳性表达。芍药昔处理后bcl・2蛋白表达减弱；在一定浓度范围内，随浓度的增加bcl-2表达逐渐减少，对照组与20μg•ml・：L组、40μg•ml-l组比较有显著差异(见表2)。表2芍药昔对K562细胞bcl-2表达的影响(-X±S)组别浓度(ug•ml-l)blc-2表达率(%)对照组一90.56&plusm

8、n;8.781086.70±3.45*