姜黄素抗食管癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文姜黄素抗食管癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究姓名：段金旗申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：张杰英；张林西201203中文摘要姜黄素抗食管癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究摘要目的：本实验使用姜黄素处理人食管癌Eca-109细胞，CCK．8法检测姜黄素对Eta-109细胞的抑制作用、流式细胞技术检测早期凋亡率和细胞周期、琼脂糖凝胶技术检测有无Ladder状条带形成，电镜技术观察细胞超微结构，免疫细胞化学技术等检测几种凋亡相关蛋白的表达情况。通过使用上述研究手段，多角度、全方位的观察姜黄素对Eca-109细胞的杀伤作用及其可能的机制

2、。方法：lCCK．8法检测不同浓度姜黄素(20，40，80pmol·Lo)、不同时间点(12h．24h，48h，72h)作用于Eca-109细胞的增殖抑制率。2应用Caspase3活性检测试剂盒对Eca．109细胞用药前后Caspase3活性进行检测分析。3流式细胞技术检测姜黄素作用于Eca．109细胞24h后的细胞周期变化及凋亡率情况。4琼脂糖凝胶电泳技术检测姜黄素干预Eca．109细胞24h后，寡核苷酸片段(DNAladder)的形成。5收集姜黄素作用后的Eca．109细胞，制备超薄切片，透射电镜观察Eta．109细胞超微结构的改变。6采用Hoechst332

3、58染色试剂盒对Eca。109细胞用药前后，细胞的凋亡情况进行检测分析。7免疫细胞化学技术检测凋亡相关基因Bax和Bcl．2的表达情况。结果：1CCK．8结果显示：体外培养的食管癌Eca．109细胞中加入不同浓度的姜黄素(20、40、80I．tmol·L。1)，分别培养12h、24h、48和72h，各组生长抑制率有明显增高，且呈剂量浓度依赖性，组间差异有显著性(尸

4、．09倍，差异具有统计学意义(氏O．05)．中文摘要3流式细胞术检测发现，姜黄素作用后，Eca-109细胞凋亡率明显升高，与阴性对照组比较差别有统计学意义职O．05)，且呈剂量相关性。姜黄素抑制了Eca．109细胞的增殖，其细胞周期在GJM期受到阻滞。4琼脂糖凝胶电泳结果显示，经姜黄素处理过后的Eca．109细胞DNA，电泳时出现明显的Ladder状条带，提示姜黄素可诱导Eca-109细胞凋亡。5电镜观察Eca-109细胞超微结构发现，加入姜黄素作用于癌细胞后，细胞结构发生显著改变。可见线粒体、溶酶体及内质网等细胞器减少或消失，细胞核异染色质增多；染色质分布不均成

5、团块状，凝集在核膜下，为致密的半月形团块；可见核固缩、核畸形或核碎裂，凋亡小体形成等改变，其作用强度随药物作用时间和浓度的增加而增强。6Hoechst33258染色可见，经_201xrnol·L‘1姜黄素作用12h后未见明显凋亡细胞；随着药物作用时间的延长及药物浓度的增加，发生凋亡的细胞显著增加。409rnol·LJ姜黄素作)羽48h后，可见有较多细胞发生凋亡。7免疫细胞化学染色显示，随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长，抗凋亡基因Bcl．2蛋白表达减弱，促凋亡基因Bax蛋白表达增强。结论：姜黄素抑制食管癌Eca-109细胞增殖并诱导其凋亡，机制可能与破坏细胞超微

6、结构、阻滞其细胞周期G2／M期、上调促凋亡基因Bax的表达，同时下调凋亡抑制基因Bcl．2表达等有关。关键词：姜黄素；人食管癌；Eca．109细胞系；流式细胞术；透射电镜；免疫细胞化学英文摘要TheMechanismStudyOfCurcuminOnApoptosisInductionInEsorhagealCancerCellsABSTRACTObjective：Inordertomakeafurtherstudyofcurcuminanti-tumormechanism，Eca-109cellgrowthinhibitingratesinducedbycurc

7、uminwereinvestigatedbyusingCCK一8assay．DNAgelelectrophoresisfordetectionofDNALadder,electronmicroscopyobservationtechnologyfordetectionofultrastructure，immunocytochemistryfortheexpressionofapoptosisrelatedgene．Throughtheuseoftheaboveresearchmethod，thispaperwilltrytoexploreitspossibleme

8、chani