vegf-b基因靶向sirna对人肝癌细胞hepg2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文VEGF--B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响姓名：吴剑飞申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：唐瑞峰201203一⋯．一⋯⋯一．一．一．⋯一：?一j=-；j’}、7至GF—B蓥霉魏国siRMA对入肝雾：；缀穗沁p磊2强国裸鼠皮下种植瘤的影晌摘要目的：抗人VEGF．B媾因siRNA载体阳陡质：随稳定转染人肝癌细胞侏HepG2细胞，将VEGF．B低表达HepG2宝雨饱种值于臻鼠皮F成瘤，以鼹融VEGF．B基因摹巴向siRNA对H十瘟细泡生物学持性的

2、鬃绷匀，为’蝌蓥的基闲治疗开辟新的靶点。方法：采用已构建好+’i枣t’tJ3组VEGF—B基因靶商siRNA载嘲：曰{纠贡：随剐1缸biⅢI[,tc．卜陛对照空拔质：陵瞬时转染人孙瘟细胞株HepG2细月巴，前3组经VEGF．B靶向siRNA阳性质粒转染fi勺HepG2细胞通过杀稻痛楚素5“e．,”sg。筛选后，获得的3组VEGF—B低表达的HepG2细胞，最后萸得到四组HepG21酗渔：三组VEGF。B旱it-r巴；’向siRNA阳性质粒转染组(分j列橡之夕jBsI组、Bs2组、Bs3组)、阴性对照空载

3、质随转染组(称之为Bs0组)。将此4组HepG2细胞扩增后分别接种于4组裸鼠皮下(每组6只，共24只)，建立^、犴癌细咆裸鼠皮下眵随熘馍型．4绢．裸臼I／lfl。分／别砀；之为PsO组、Psi组、Ps2组、Ps3组。5阎后对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体积、重量，提H％州q南I：,'f劫EEl组织mRNA，经P,T-PCR检测VEGF—B基因的表达，研究VEGF·B基区j靶向siRNA对肝癌细胞增蒲及表达VEGF．B的影响。结果：1分别种植BsO组、Bsl组、Bs2组、Bs3组HepG2细}j色的裸鼠，在

4、接利，细胞后l周左右均成瘤，5周后肿瘤体积分别为(2．274+0．451)cm’、(O．709士0．333)cm3、(O．698土0，614)cm3、和(O．649+0．430)cm3，瘤重分别为(1．451+0．287)g、(O．507+0．212)g、(0．630=0．498)g、和(O．583±0．343)g，Psi组、Ps2组、Ps3组的体积和瘤重均显著小于Ps0组(P

5、组和Ps3组的VEGF．BmRNA的表达量分别为1．496+0．399、O．640+0．316、O．672+0．364币口0．803+0．438。三种VEGF—B革巴向siRNA阳性质粒组的裸鼠皮下种植瘤VEGF．BmRNA表达水平均显著低于阴性对照’’广’'。●‘⋯‘●●一⋯⋯一?黪。‘。一』幺i∽-U。。．05j。结论：成功建立阴性对照空载质粒组和三种VEGF—B基因靶向siRNA转染组HepG2肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型，VEGF．B基因靶向siRNA能够抑制HepG2细胞在裸鼠体内增殖能力，并能

6、降低肿瘤组织VEGF—B基因表达。关键词：肝癌；HepG2细胞：VEGF—B；siRNA；转染：裸鼠；RT-PCR2荚文摘要一。⋯⋯～⋯⋯+一～～——～一--_⋯～⋯～⋯⋯一⋯一一～，一⋯一_一⋯⋯一Eh'ectofVEGF—BgeaetargetedslRNA㈣theg’．mythofnudemicesubcutaneousimplantedtumorofhumanhepatomacarcinomacellHepG2cellABSTRACTObjective：ToexposetheeffectofVE

7、GF．BgenetargetedsmallinterferingRNA(siRNA)onbiologicalcharacteristicsoflivercancerandtoopenupanewtargetedforgenetherapyoflivercancer．Wetransfectcdstablyhumanhepatomacarcinomacell(HCC)lineHepG2cellsbyanti．huInanVEGF．Bge-netargetedsiRNAvectorpositiveplasmi

8、dandimplantedtheceilswhichhadalowexpressionofVEGF—Bgeneinnudemice-toformsubcu。taneoLIstunlOr．Methods：ThreegroupsofhumanHCClineHepG2cells~、，eretransientl、，transfectedbythreekindsofVEGF—BgenetargetedsiRNAvectorplasmidandstab