燕窝中胶原蛋白的测定

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1、福建农林大学金山学院实践报告福建###########实践报告燕窝中胶原蛋白的测定专业：食品质量与安全学号：*********姓名：******实践课程：科研实践实践项目：食品理化检验实践单位：******科研大楼指导教师：********实践单位评分实践报告评分总评分2011年1月15日5福建农林大学金山学院实践报告燕窝中胶原蛋白的测定摘要:本文以燕窝皮为原料，采用木瓜蛋白酶酶解提取胶原蛋白。考察了底物浓度、酶浓度、酶解时间、pH,温度等工艺条件对胶原蛋白提取率的影响。试验结果表明:木瓜蛋白酶添加量为1%,料液比为1:10,酶解时间8h,酶解温度为40℃时

2、.最高提取率为11.01%.关键词：燕窝、木瓜蛋白酶、胶原蛋白测定。燕窝性平、味甘，人肺、胃二经，有补肺养阴、化痰止咳、润燥泽枯、补中益气的功效，主治肺痊、咳嗽、咯血、虚损、痰喘等症，是家喻户晓的药食两用高级滋补品。燕窝基原为雨燕科Apodidae金丝燕属Collocalia的几种鸟类唾液为主筑成的巢。[1]主产于印度尼西亚、泰国、缅甸、日本以及我国偏南部地区等地，广东怀集在每年农历六月六都有攀岩采燕窝的习俗。随着人们生活水平的提高，燕窝的需求量越来越大。目前市场销售的燕窝商品多来自东南亚，众多的燕窝研究文献中，未见有对我国燕窝进行系统研究的文章。本文对广东

3、怀集、云南、海南等地产燕窝总灰分、总氮量及氨基酸含量进行分析，同时以印尼产燕窝对照，结果，两者含量相近，提示中国产燕窝具有良好开发利用价值。1．材料与方法1．1材料①燕窝②化学试剂：羟脯氨酸，氯胺T，盐酸，氢氧化钠，柠檬酸，柠檬酸三钠，高氯酸，异丙醇，对——二甲基氨基苯甲醛等均为分析纯试剂。1．2仪器①ＸiangyiL-530多管架自动平衡离心机长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司；②HH-6数显恒温水浴锅金坛市精达仪器制造厂；③UV-2000型紫外可见分光光度计上海洪富仪器仪表有限公司；④AL104梅特勒-托利多分析天平上海茸岩仪器有限公司；⑤De

4、lta320酸度计(梅特勒一托利多公司)；⑥电热恒温鼓风干燥箱；⑦MARS5型微波消解仪(美国CEM公司)。1．3方法1.3．1测定原理[2]5福建农林大学金山学院实践报告胶原蛋白在浓酸或浓碱的条件下，经过高温长时间水解，彻底变成游离的氨基酸。其中的羟脯氨酸首先用氯胺T氧化生成含吡咯环的物质，然后以高氯酸溶液除去剩余的氯胺一T，加入对——二甲基氨基苯甲醛溶液作为显色剂，生成红色化合物，用紫外可见分光光度计，在558am处测吸光值。从而可得羟脯氨酸的质量浓度。1.3.2试剂的配制0．75％溶液氯化亚锡：将氯化亚锡7．5g溶于500mL水中，再加入500ml浓盐

5、酸：12moUL盐酸溶液：lmol／L、10mol／L氢氧化钠溶液：缓冲液：将50g柠檬酸，26_3g氢氧化钠和146．1g结晶乙酸钠fGB694)溶于水．稀至1L．此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。氯胺T溶液：将1．41g氯胺T，溶于10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)；显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35mL高氯酸溶解。缓慢加入65mL异丙醇；500ug／mL羟脯氨酸标准储备液：称取50．0mgCL(一)-羟脯氨酸用少量水溶解，加一滴6moUL盐酸，定容至lOOmL容量瓶中：5ug／mL羟脯氨酸标准工作液：吸

6、取标准储备液5．0Oral于500mL容量瓶中，定容。1．4试样处理准确称取一定量样品，精确到0．0001g。使样品蛋白质含量在10-20mg范围内；将称好的样品放予水解管中。在水解管内加12mol／L盐酸10～15mL(视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样品(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3-5rain，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近Opsi)，然后充人高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110-．1'12的恒温干燥箱内，水解6h后取出冷却。打开水解管，趁热将水解溶液过滤

7、于100mL三角瓶中．用6moI／L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸，冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中，用10mol／L、lmol／L氢氧化钠溶液调节pH为8+-0．2，过滤于50mL容量瓶中，用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀，反复三次，把洗液并入滤液中，以水洗至刻度，摇匀备用。1．5分析测定1．5．1标准曲线的绘制吸取0．00、10．00、20．00、30．00、40．00mL，分别置于100mL容量瓶中，定容摇匀。浓度分别为0．0、0．5、1．0、1．5、2．0ug／mL。取不同浓度的上述溶液4．00

8、mL，分别加入20mL具塞试管中，加氯胺T溶液2mL