当归芍药散治疗原发性痛经效应物质基础的研究论文

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1、本论文由2005年度江苏省高校自然科学基金重大基础研究项目(NO．06KJA36022)江苏省方剂研究重点实验室开放课题资助项目(N0．022021014002)资助完成，谨致感谢l本人郑重声明：所呈行研究工作所取得的不包含任何其他个人研究做出重要贡献的完全意识到本声明的学位论文作者签名：王毫才日期：2稍年／月lo日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，

2、可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于保密囫，在卫年解密后适用本授权书。不保密口学位论文作者签名：王毫』签字日期：2嘲车铜／oB学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：乙火签字日期：2力蛑多自，厂日电话：邮编：原发性痛经为妇科常见疾病，临床常采用NASIDS、口服避孕药、Ca2+拮抗剂等治疗，由于存在对消化道、心脏或肝肾等不良反应而限制了临床应用。当归芍药散系张仲景《金匮要略》方，由当归、芍药、川芎、白术、茯苓、泽泻组成，主治妊娠“腹中疼痛"，以及妇人杂病“腹中诸疾痛"，后世医家常用本方治疗妇科疾病。本文在前期建

3、立了原发性痛经器官模型的工作基础上，遵循方剂配伍与方病结合原则，采用多效应评价平台和活性追踪与化学分离分析紧密结合的思路，对当归芍药散治疗原发性痛经的效应物质基础进行研究。本论文工作主要包括三部分：一、样品制备方法研究和样品制备：全方水提取物和50％乙醇提取物经小鼠离体子宫原发性痛经模型效应评价和化学成分分析，结果显示，当归芍药散治疗原发性痛经的主要效应物质可能为醇溶性成分，仅采用水提取均有可能遗漏部分效应成分。基于此研究结果，我们制定了水提醇沉、残渣醇提、大孔吸附树脂吸附洗脱分离和溶剂萃取结合的样品制备方法，将全方系统分为21个部位，为进一步的系

4、统生物效应评价和化学成分分析奠定基础。二、当归芍药散治疗原发性痛经效应评价平台的建立和各分离部位的效应评价：①建立小鼠离体子宫原发性痛经模型：催产素诱发离体子宫强烈2005级硕士研究生毕业论文收缩，模拟痛经时子宫的痉挛状态，用于当归芍药散治疗原发性痛经效应部位的筛选；②建立环氧化酶．II抑制剂筛选平台：比较ELISA、放免法、荧光活性法、比色法等检测NIH3T3细胞株、RAW264．7细胞株、大鼠腹腔巨噬细胞中PGE2的含量或环氧化酶．II的活性时方法的优点，以比色法最为简便、快捷、高效，适合环氧化酶．II抑制剂的高通量筛选和当归芍药散效应物质基础

5、研究。③当归芍药散对大鼠腹腔巨噬细胞NO产量的调控：选择与原发性痛经和炎症的发生、体内PGs的产生等高度生物相关NO为对象，Griess法检测含量，研究当归芍药散对其NO产量的调控。上述三个生物效应评价方法结果可靠、稳定，且后两个具备高通量优势，适合作为当归芍药散治疗原发性痛经效应物质基础的筛选评价平台。对所分离得到的各化学物质部位的生物效应进行评价，结果发现主要有效部位为：当归芍药散挥发油部位(DSS．1)、大孔吸附树脂30％、40％、50％、70％乙醇洗脱部位(DSS．10、DSS．1l、DSS一12、DSS．14)和水提残渣90％乙醇提取石油

6、醚萃取部位(DSS．18)。三、当归芍药散治疗原发性痛经效应物质部位的成分分析：采用}玎)LC．DAD．ESI．MS、GC．MS、对照品对照等方法并结合文献，对当归芍药散效应部位进行成分分析。结果表明，当归芍药散挥发油(DSS．1)主要化学成分为桉叶烯、古香油烯、大根香叶烯、匙叶桉油烯醇、苍术酮、丁烯基苯酞内酯、z-藁本内酯、新蛇床内酯、川芎内酯A，且以藁本内酯(42．75％)的含量最大。大孔吸附树脂吸附30％、40％乙醇洗脱(DSS．10，DSS．11)主要化学成分为芍药内2005级硕士研究生毕业论文酯苷和芍药苷，50％乙醇洗脱(DSS．12)主

7、要化学成分为阿魏酸，70％乙醇洗脱(DSS．14)和水提残渣90％乙醇提取石油醚萃取部位(DSS．18)中白术内酯．I、白术内酯．II、白术内酯．III含量占较大比例。上述化学成分在当归芍药散治疗原发性痛经效应评价平台中效应显著，为阐明其作用机理和相互影响，对效应部位有待进一步分离分析和定量研究，对所得化合物进行效应研究，最终为揭示配伍规律和应用开发研究奠定基础，并为方剂研究思路提供参考。本文创新点①研究思路：遵循“方剂配伍与方病结合”，采用“化学分离分析与多指标效应评价结合”，准确地发现效应物质；②研究模式：本论文建立的三个效应评价平台除对当归芍

8、药散进行了效应评价，还对本课题组内另外6个复方进行了活性筛选和效应评价，有利于效率提高和资源节约，有利于各复方间的横向比较