oifntau在e.coli中的可溶性表达与其活性的初步研究

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1、oWN．tau在E．Coli中的可溶性表达及其活性的初步研究论文题目：olFN．tau在E．Coli中的可溶性表达及其活性的初步研究专业：微生物与生化药学导师：宋长征研究生：徐晓健摘要IFN．tau是I型干扰素(interferon，IF№家族成员。绵羊IFN．tau(ovineinterferon．tau，oIFN．tau)是在绵羊孕体滋养层表达，在胚胎形成中发挥重要作用。而且o]]TN．tau没有糖基化。与其他类型的干扰素类似，oIFN．tau有抗病毒活性、抗增殖、抗肿瘤、免疫调节和治疗作用。但是。礤N．tau在特定的时间和空间才会表达，并且直接组织

2、培养和提取过程复杂，通过基因工程技术表达重组oIFN．tau成为一种有效的途径。目前用于重组蛋白表达的系统有很多，包括原核中的大肠杆菌表达系统，真核中的酵母表达系统等。而酵母表达系统存在翻译后修饰有可能导致蛋白的糖基化。在此情况下，大肠杆菌成为重组蛋白表达的首选系统，这是因为其遗传背景清楚、培养条件简单、生长快、成本低、易大规模培养和拥有大量可利用的表达载体、宿主和纯化系统。但是，大肠杆菌表达系统通常会产生不溶的无活性的蛋白聚集，即包涵体，这是该系统应用的巨大障碍。解决这一问题的传统方法是对包涵体进行变性复性处理，但这种方法费时费力，且得率很低。随着对大

3、肠杆菌中蛋白质折叠机制的深入研究，目前已经找到了一些提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法；其中，分子伴侣和融合表达策略是最常用的方法。在本研究中，我们利用不同的共表达分子伴侣体系，化学分子伴侣体系及一种融合表达体系，探索重组oIFN-tau在大肠杆菌可溶性表达。研究结果显示，三种不同的共表达分子伴侣体系对重组oIFN-tau在大肠杆菌可溶性表达没有显著影响，无法促进其可溶性表达；而化学分子伴侣体系中的D一甘露醇和乙醇促进了oIFN-tau的可溶性表达。但是，NusA融合表达体系使得重组olFN．tau在大山东省医学科学院硕士学位论文肠杆菌中完全可溶性

4、表达。此外，我们还制备了oiFN．tau的抗体。然而，这些融合标签也带来了一些新的问题，如这些标签的最终切除、融合表达后是否还保持原有目的蛋白的结构和活性。为此，我们对oIFN．tau的生物活性做了初步检测。表达的融合蛋白经肠激酶切除标签蛋白NusA．6His后，再经纯化后，o删．tau能够抑制肿瘤细胞生长，而且启动了肿瘤细胞的凋亡相关蛋白。oIFN-tau的作用机制是oIFN-tau与子宫内膜上皮细胞的I型干扰素受体结合，并激活JAK-STAT通路。进一步的研究结果显示，oIFN-tau可以激活STAT3的磷酸化。因此，NusA融合表达体系使得重组。删

5、．tau在大肠杆菌中完全可溶性表达，并且该方法得到的oIYN．tau具有生物活性。关键词：oIFN．tau，大肠杆菌，可溶性表达，分子伴侣，融合标签，NusA2ThesolubleexpressionofoIFN—tauinECo／／andtheresearchofitsbioactivityMajor：MicrobiologyandBiochemicalPharmacyTutor：SONGChang-zhengPostgraduate：XUXiao-jianAbstractInterferontanisamemberoftheTypeIinterfer

6、on(ⅢN)family．Ovineinterferon-tau(oWN-tan)isamajorproductofovineconceptusesduringtheperiodbeforethetrophoblastmakesfirmattachmenttotheuterinewallandbeginstoformaplacenta．AndoIFN-tauisnotglycosylated．SimilartoothertypeIIFNs，IFN-tauhasantiviral，antipr01iferative，antitumor,immunomodu

7、latoryandtherapeuticproperties．However,beausetheexpressionofIFN-tauistemproralandspatial，andpurificationfromtissueisverytediousandcomplicated，it’SaneffectivemethodtoproducerecombinantoIFN-taubygeneengineering．Sofar,severalexpressionsystemsforrecombinantproteinproductionareavailab

8、lebyusingdifferenthostsincludingtheproka