gmcsf基因修饰同种异体肺癌细胞系制备瘤苗治疗肺癌的实验的研究

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1、天津医科丈学博士学位论文学位论文原创性声明本人郑重声嘴：所呈交的论文悬我个人在等师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标浪引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体髓经发表或撰写邋的研究成果，与我一间工作的同志对本研究所做的任何赏献均已在论文中作了明确的说明并袭示了谢意。学位论文作者签名：茜期≯静龟簪去片}好酲学位论文版权使用授权书本人宠全了解天津医科大学毒关保餮、侵耀学位论文豹规定，靼：学校蠢权将学位论文熬全部或郝分内容缡入有关数据黪送行检索，著采餍影窜、缩印或搀播等复秘手敬保存、汇编以供戆阕和缮溪。溺懑学校囊嚣家有关部f

2、l竣瓠椽送交论文，并缡A露关数据露。作者签名：退窭墨导师繁襄：——日瀚：芦g年6身努融天津医科大学博士学位论变摘樊摘耍第一部分基因转染小鼠肺癌细胞系瘤荫的构建和鉴定目的：构建GM．csF基因修饰鲍小鼠肺癌细胞系(LLe和LA795)瘤茁，并鉴定其在瓣瘤细施的袭这。方法：R1：PcR法扩增小鼠GM—eSF基因，将目的基翻GM—csF谶入p佃18一T裁体，并对重组质粒进行扩增与撩定。以测序正确的重组质粒为搂蔽扩建鬟瓣基强，并将其连接弱pIREs2一暑GFP载传，褥建重缎GM—cs卜pIREs2EG”载体。利用该质粒转染小鼠肺潞细胞系制苷肿瘤疫苗，ELIsA法检

3、测转染后肺癌细胞GM—csF蛋白的分泌。结果：(1)经测序证实R1二PcR正确扩臻了小鼠GM*csF基篱；(2)经酶翻鉴定证实GM．csF．p碾Es2一E磷p重组质粒合成正确(3)重组质粒GM．csF。pIRBs2一EGFp转染获得表达GM．csF基因的小黥肺癌细腱；(4)转染蜃的小鼓肺癌细胞经EHsA法鉴定有楣应GM-csF簧白表达，表达量适合带8备肿瘤疫苗。结论：(1)成功构建装达GM．csF的重组pIREs2_EGFP质粒；(2)转染后的小鼠肺癌细胞能够表达足够的GM．csF豹蛋叁，盈功能正嚣，或功割冬，j、鬣菇癌缎戆癌萤。第二部分酬一CSF分泌性全

4、纲胞_

5、l申瘸疫菌蛉动螺实验及免疫援刳磷究目的：搽讨表达GM—csF的小氛啼癌细臆(自体和嗣种异体)制餐瓣瘥疫苗懿抗肿瘤俸用和祝翻。方法：<1)分成预防组、治疗组和化疗组。预防组和治疗组分为分泌性自体和同种异体瘤菌组、自体和同种异体瘤苗组、pBs对照组；纯疗缰分为分泌性爨傣窥恩静舅体癌菱÷纯疗组、单缝诧疗组；(2)颈簖缱在预防接种后，接种Llc，观察成瘤时问、成瘤后生存时间、ELIsA检测小鼠外周血细胞因子的变化、流式细胞法检测检测外周血细臆贬群、脾细胞杀伤实验、}天津医科大学博士学位论文摘要ELIsPoT实验、接种部位免疫组化等；(3)治疗组在接种LLC

6、，成瘤后，给予不同的瘤苗接种治疗，观察上述指标；(4)化疗组在接种LLc成瘤后，给予低剂量卡铂化疗，3天后给予不同的瘤苗接种治疗，观察上述指标。结果：(1)各组实验证实在GM．csF分泌性全细胞肿瘤疫苗接种后能够激发机体的免疫应答，主要为cD8+T细胞的增殖和活化，流式细胞检测、杀伤实验和EusoPT实验也能证实，cD4+T细胞的应答不明显；外周血Thl类细胞因子增加明显，TIl2类无明显变化，免疫抑制类细胞因子在多次接种后增加；(2)预防组在GM-csF分泌性全细胞肿瘤疫苗接种后，小鼠的成瘤时间明显晚于其它各组，生存期也长于其它各组；(3)治疗组的生存期

7、各组之间无明显差异；(4)化疗组的生存期明显好于单纯化疗和单纯免疫组；(5)GM．csF分泌性的自体瘤苗效果稍好于同种异体瘤苗，但无统计学差异。结论：GM．csF分泌性自体或同种异体瘤苗具有抗特异性肿瘤的作用，能够强化肿瘤的免疫功能，提高机体抗肿瘤的免疫反应，抑制肿瘤生长，延长生存时间。同种异体瘤苗的免疫效果与自体瘤苗的免疫效果基本近似，由于其在制各过程中的巨大优势，使其有可能成为制备肿瘤疫苗的重要方法。瘤苗免疫治疗结合化疗显示出良好的前景，为联合化免治疗提示了非常值得期望的前景。关键词：肺癌、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、疫苗、转染、免疫治疗、化疗天津医科

8、丈攀博士学位论文摘要Abstra“P矗rtI：Conslructio娃ofTu脚rⅥec姗UsingLungC矗ncerCellLinenansfectedwi睡GM《S琴ge№Purpose：TbconstnlctmetumOrvaccineusinglungcancercellslinesLLCandLA795tr8nsfectedwi也GM-CSF窟eneandtoiden虹每也egeneeXpressio珏inhHnoroells．醚e缘醴s：醚蜮∞GM．eS攀窖enewasa越瓣i基ed酚艇二Pe爻撙e垃l。d．彳№mGM．CSFgenewasi

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