反复自然流产的细胞遗传与分子遗传机制研究

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1、博士学位论文摘要自然流产系指妊娠不到28周、胎儿体重不足10009、胎儿及其附属物脱离母体而自然中止者，其发生率占人类妊娠的12％～15％。当自然流产连续发生3次以上时则称为反复性自然流产(recurrentspontaneousabortion，RSA)。妊娠早期反复自然流产(Earlyrecurrentspontaneousabortion，ERSA)指妊娠12周内反复发生的自然流产。据统计，人类妊娠大约70％不成功，50％左右的受精卵在下次月经来潮之前就发生了流产，即所谓临床前流产。这种流产可能并未被本人察觉而仅仅认为是一次血量偏多的正常月经或延期月经。

2、一些回顾性研究和前瞻性研究均指出临床可诊断的妊娠在前三个月内的自然流产为10％～15％，ERSA的发生率为2％～5％。真正能够发育成熟正常分娩者仅占人类妊娠的25％左右。由此可见，人类流产的发生率相当高。导致反复性自然流产的原因很多，而且约有一半的早期流产原因不明。因此，探讨自然流产的病因，对于生殖与避孕具有十分重要的意义。本研究共分为三个部分，其主要实验方法和实验结果如下：第1章反复自然流产的细胞和分子细胞遗传学研究及干预本部分的研究工作旨在建立一个从细胞到分子细胞水平的技术平台，可以检测自然流产中各种染色体异常，包括染色体微小结构异常及染色体复杂重排，并可

3、对染色体异常导致自然流产在胚胎着床前进行干预。首先，我们对1780名于孕28周前自然流产的患者进行细博士学位论文摘要胞遗传学检查；在此基础上，对其中两例疑有染色体微小易位的病例，采用显微切割获得的亚端粒探针，1lq23．3一qter(两个病例均用此探针)、12q24．1一qter、22q13．1一qter，通过双色FISH技术分别对这两个病例的中期染色体进行确诊；对l例细胞遗传学检测无法确诊的染色体复杂重排，采用显微切割技术自制5号、16号长臂和20号短臂染色体特异性探针，应用正相和反相染色体涂染技术进行确诊；最后，为了治疗因染色体异常导致的自然流产，本部分对

4、15例染色体结构异常携带者进行了胚胎植入前遗传学诊断助孕的尝试。结果表明，在1780例具有自然流产史的夫妇中，发现异常核型57例，异常率为3．20／o；其中男性21例，占2．40％(21／874)，女性36例，占3．97％(36／906)，女性染色体异常者高于男性(P

5、TBP12+；TBPll+，TBPl2+)；46，XY,t(11；22)(q25；q13．3)．isht(11；22)(TBPll+，TBP22+；TBPl1+，TBP22+)。通过正相和反相染色体涂染技术，确定1个涉及5号、16号及20号染色体复杂重排的核型为：46，XY,t(5；20；16)(q35；p13；q12)，ins(5；20)(q35；pllpl3)．isht(5；20；16)(CAP5q+，CAP20p+，CAP16+；CAP5q+，CAP20p+；CAPl6q+，CAP20p+)，ins(5；20)(CAP5q+；CAP20p+)。对15例P

6、GD检测的初步结果表明，9号染色体臂问倒位组男女携带者植入率及临床妊娠率之间无显著差异；男、女罗氏易位II博士学位论文携带者活检胚胎率和异常胚胎比率无显著差异，但单体胚胎、其它异常胚胎(包含除三体、单体和2倍体之外的其他混乱的异常信号)、移植胚胎比率之间差异显著。结果证实了染色体异常是导致自然流产的重要原因，分子细胞遗传学技术不但可以确诊染色体微小结构异常，而且对在染色体复杂重排核型的确诊上具有重要意义。应用胚胎植入前诊断技术，可以解决染色体异常导致的自然流产问题，是一种积极性的优生途径。关键词反复自然流产，显微切割，荧光原位杂交，染色体复杂重排，胚胎植入前遗

7、传学诊断第2章比较基因组杂交技术在反复自然流产中的应用研究表明胚胎发育过程中染色体发生异常改变的几率远大于RSA夫妇染色体异常的发生率，胚胎自身染色体的异常是导致RSA发生的主要原因之一。为了解遗传因素在RSA中的可能影响，进一步阐明其发病机制，本研究收集早孕3个月内发生反复自然流产2次以上患者(排除其它病因)的流产胚胎标本15例，采用比较基因组杂交技术对其进行研究。以正常男性健康志愿者外周血淋巴细胞制备正常中期染色体。用红色荧光染料标记商业购买的胎盘DNA，作为正常参照DNA。抽提流产标本的绒毛组织DNA，用绿色荧光标记。用标记好的待检组织DNA和参照组DN

8、A探针同时与正常中期染色体玻片杂交，用