SCT3023-2004-无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法.pdf

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1、食品标准网（http://www.spbz.cn/）SC/T3023-2004无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法发布时间：2004年1月7日实施时间：2004年3月1日发布单位：中华人民共和国农业部1、范围本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法——生物法。本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素(PSP)的测定，其他贝类食品中PSP的测定可参照执行2、原理根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每100g贝肉内的PSP的含量。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝

2、类毒素的总量。3、定义下列定义适用于本标准。鼠单位mouseunit，MU对体重为20g的小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量。4、试剂4.1盐酸溶液：0.1mol/L。4.2盐酸溶液：5mol/L。4.3氢氧化钠溶液：0.1mol/L。4.4麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准溶液：100μg/mL，经酸化，含有20％的乙醇作为保护剂，冷藏保存，无限期稳定。5、仪器和设备5.1均质器。5.2天平(感量0.1g)。5.3离心机。5.4pH计。5.5秒表。5.6玻璃皿：烧杯、量筒、容量瓶、搅拌

3、棒等。5.7注射器：1mL。5.8注射器针头：8＃。5.9小鼠：体重为19g～21g的健康ICR系雄性小鼠，若体重<19g或>21g，查表C.1的校正系数便可得到实际的死亡时间，体重>23g或已用过的小鼠则不能使用。6、ICR系小鼠毒性单位的确定6.1PSP工作标准溶液用移液管取100μg/mLSaxitoxin标准液1mL．于100mL容量瓶中，加入用盐酸酸化至pH为3的蒸馏水并定容。该液为lμg/mLSaxitoxin标准液，pH在2.0～4.0之间。在3℃～4℃条件下能稳定数周。6.2测定用标准溶液分别用10mL、15mL、2

4、0mL、25mL和30mL水稀释10mL浓度为1μg/mL的Saxitoxin标准液，稀释液的pH应为2～4。6.3中值死亡时间的标准液选择1食品标准网（http://www.spbz.cn/）6.3.1将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小鼠数只，选择中值死亡时间为5min～7min的浓度。如某浓度稀释液已达到要求，还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验。例如：用25mL水稀释的10mL标准液在5min～7min杀死小鼠，还需进行24mL＋10mL和26mL＋10mL的稀释度的试验。6.3.2先将小鼠称重(精确到0.

5、5g)，以10个小鼠为一组。用中值死亡时间在5min～7min内的各种浓度的标准稀释液两份(最好是三份)注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需死亡时间。6.3.3记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s记为5s，8s记为10s(见附录B)。6.4毒素转换系数(CF)的计算6.4.1小鼠中值死亡时间的选择若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间<5min或>7min则弃去该组结果；若注射另一浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间在5min～7min，即使个别小鼠死亡时间<5min或>7min，也应使用该组

6、的数据。但是若注射某浓度标准稀释液后，10只小鼠中有3只以上存活，则要另取10只小鼠进行重复试验。6.4.2校正鼠单位(A)根据注射毒素后中值死亡时间为5min～7min的10只小鼠的个别死亡时间，由附录B分别查出鼠单位(M)，再由附录C查出小鼠的重量校正因子(是)，每毫升标准稀释液的校正鼠单位(A)按公式(1)计算。A=k×M………………………………………(1)式中：A—校正鼠单位(MU)；M—鼠单位(MU)；K—小鼠的重量校正因子。6.4.3毒素转换系数(F)毒素转换系数(F)按公式(2)计算。F=C/A………………………………

7、………(2)式中：F—毒素转换系数；C—每毫升实际毒素含量(μgSAX/mL)；A—校正鼠单位(MU)。6.4.4计算每组10只小鼠的平均毒素转换系数值(f),再计算各组间的平均毒素转换系数值(F)，并以此为标准做常规检测。6.5毒素转换系数(F)值的定期检查6.5.1如PSP检测间隔时间较长，每次测定时要用适当的标准稀释液注射5只小鼠，重新测定F值。如果一周有几次检测，则用中值死亡时间5min～7min的标准稀释液每周检查一次，测得的歹值应在原测定F值的±20％范围内。6.5.2若结果不符，用同样的标准稀释液另外注射5只小鼠，综合

8、先前注射的5只小鼠结果，算出f值。并用同样的标准稀释液注射第二组10只小鼠，将第二组求出的f值和第一组的f值进行平均，即为一个新的F值。6.5.3重复检查的F值通常在原结果的±20％之内，若经常发现有较大偏差，在进行常规检测前应调查该