利用噬菌体随机肽库筛选类风湿关节炎相关多肽与诊断价值

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1、RA，SLE，andnormalpeopleweredetectedwiththepositivecloneofdifferentDNAsequence．ResultsAfter4roundsofscreening，9positivecloneswereacquired，theyexpressed2kindsofDNAsequencenamedmimotopelandmimotope2．Thediagnosticspecificity,positivepredictivevalue，AndYoudenare

2、94．4％．91．7％and149．4％．ThepeptideofmimotopeIisassociatedwithRA，ItsaminoacidsequenceisQSESAGPTTSRR．Thesequenceissimilarto137～148aminoacidsequenceofhumanfilaggrin．Conelusion1．ItisfeasibletofindantigenepitopebypolyclonalAKAinseraofpatientwithRA．2．Thepeptideasso

3、ciatedwithRAisacqukedbyscreeningaphagerandompeptidelibraryusingpolyclonalAKAofpatientswithRA．ItisspecificandconfirmedindiagnosingRA．Keywords：phagedisplayrandomlibraryrheumatoidarthritismimotopediagnosis·d‘利用噬菌体随机肽库筛选类风湿关节炎相关多肽及诊断价值硕士研究生：指导教师：指导小组：专业名称：罗红刘辉

4、教授程桂芝副教授免疫学月Ij吾类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种比较常见的自身免疫病，其发病率在世界范围内约为I％．3％⋯。患者可导致严重的关节损伤和破坏，甚至丧失劳动能力。如能早期确诊，积极治疗，80．90％的患者可以改善预后，延缓病情【’1。目前国际通用的美国风湿病协会(AmericanRheumatismAssociation，ARA)1987年修订的诊断标准pJ以临床表现为主，类风湿因子(RF)是唯一的血清学诊断指标。但本病早期症状隐匿多变，难以早期明确诊断：RF诊断

5、特异性也不令人满意。因此探讨对类风湿关节炎具有早期、特异性诊断价值的实验指标成为人们研究的热点。1979年Young[4]等以Wistar大鼠食管中、下1／3段的横切面组织为基质，用间接免疫荧光法(IIF)检测到RA患者血清中有一种与大鼠食管角质层成分反应的抗体，称为抗角蛋白抗体(anti．keratinantibody,AKA)。随后很多学者相继报道AKA对RA诊断特异性可达95．99％t铀】，而且在发病早期2．3年即可出现于血清和关节滑膜液中【71。目前，虽然AKA对RA的诊断价值已被公认，但是作为检测

6、用的抗原一角蛋白(keratin)的制备还存在一些问题。目前的检测方法中间接荧光法的角蛋白主要来自大鼠食管上皮切片，ELISA法所用角蛋白除从大鼠食管上皮中提取外，还主要来源于人包皮环切术切下的包皮组织和手足部胼胝。而角蛋白的表达具有比较严格的组织特·{‘异性，而且不同人种、不同个体间表皮细胞表达的角蛋白存在个体差异碍】，使测定难以标准化。另外，Iu病因不明，激发AKA的抗原结构不清，是阻碍RA相关抗原研究的关键。而噬菌体表面展示技术有助于解决这一问题。该技术是将外源蛋白的基因与丝状噬菌体的外壳蛋白PIII

7、或PVIII基因融合，进而将外源短肽表达于噬菌体表面，被展示的短肽可以维持相对稳定的空间结构和生物活性，与相应的识别分子结合而发挥其生物活性。此技术用于抗原表位分析最大的优势就是不必源于天然抗原，在不必预先确知蛋白质氨基酸序列的情况下将有关的抗原表位模拟出来。本研究采用噬菌体表面展示技术，以AKA为配基筛选RA相关噬菌体克隆，试图寻找到RA特异的抗原信息，为能建立标准化、常规的RA早期、特异性诊断方法，探索RA的病因及实施免疫干预治疗奠定基础。材料与方法一．研究对象(一)RA患者组：为2002年-2004年

8、1月予大连医科大学附属二院及友谊医院就诊的门诊及住院患者。诊断符合1987年美国风湿病协会(ARA)修订的RA分类标准b1。年龄16—68岁，平均47岁，病程2年以上。女15例，男6例，共计20例。(二)RA疑似患者组：病程短于1年，有关节肿痛或／和晨僵，x线检查骨质无侵蚀，采血时不够ARA分类标准。共6例。(三)非RA疾病对照组：为系统性红斑狼疮(SLE)患者。大连医科大学附属二院住院确诊者，平均年龄43岁，女