GBT4789.7-1994-食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验.pdf

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1、GB4789.7—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofVibrioparahaemolyticusGB4789.7—19941主题内容与适用范围本标准规定了副溶血性弧菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1试管：20mm×200mm，15mm×100mm。3．2吸管1mL，5mL，10mL。3．3平皿：皿

2、底直径90mm。3．4广口瓶或三角瓶。3．5电动均质器或乳钵。3．6酒精灯。3．7接种灯和接种环。3．8试管架。3．10载玻片。3．11温箱。3．12显微镜。4培养基和试剂4．1氯化钠结晶紫增菌液：按GB4789.28中4.39规定。4．2氯化钠蔗糖琼脂：按GB4789.28中4.40规定。4．3嗜盐选择性琼脂：按GB4789.28中4.41规定。4．43.5%氯化钠三糖铁琼脂：按GB4789.28中4.42规定。4．5氯化钠血琼脂：按GB4789.28中4.43规定。4．6嗜盐性试验培养基：按GB4789.28中4.44规定。4．73.5%氯化

3、钠生化试验培养基：按GB4789.28中4.45规定。4．8革兰氏染色液：按GB4789.28中2.2规定。4．9甲基红试剂：按GB4789.28中3.4规定。4．10靛基质试剂：按GB4789.28中3.13规定。4．11V-P试剂：按GB4789.28中3.4规定。5检验程序副溶血性弧菌检验程序如下：中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.7—19946操作步骤6．1分离培养：首先称取25g，加225mL3.5%灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各1个，同时取

4、10mL，加入100mL增菌液中，放37℃8～16h培养后，涂上述平板进行分离，于37℃18～24h培养后取出观察。6．2挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。6．3涂片镜检：将三糖铁培养基反应可疑者（底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜面不变乳糖蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢）进行涂片革兰氏染色镜检形态。6．4嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐胨水中，37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10%以上盐不胨水中不生长，在7%盐的胨水中生长良好者进行下列有关试验。6．5生化试验：分别接种各类生化培养基，

5、放37℃，除V-P、靛基质、甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均可在24h观察。葡萄糖产酸+葡萄糖产气+V-P-蔗糖-靛基质-乳糖-赖氨酸-甘露醇+鸟氨酸+/-硫化氢-精氨酸-甲基红+溶血+/-注：+阳性；-阴性；+/-多数阳性，少数阴性。表2副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别葡阿β无盐胨水，%氧萄赖精鸟靛V甘拉甘鼠半硝明乳蔗肌泳盐名称化糖氨氨氨基I露伯露李乳酸胶糖糖醇动胨6810酶产酸酸酸质P醇胶糖糖糖盐水气糖苷副溶血性弧菌+-+-+++---+-d+--+d-++-V.parahaemolyticus溶藻性弧菌+-+-++++-++-

6、-+--++-+++V.alginolyticusO1霍乱弧菌+-+-+++d(++--+-++-+d--V.choleraeO1d)非O1霍乱弧菌+-+-+++d(++--d-++-+d--V.choleraenonO1d)拟态弧菌+-+-+++-(-+--+-++-+d--V.mimicusd)河弧菌+d-+-d+--++-+dd++--++dV.fluialis创伤弧菌+-+-+++-+dd--+-++--d--中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.7—1994V.uuluificus梅氏弧菌--

7、d+-d++d++d-d-d---d--V.metschnikouii霍利斯弧菌+----+------++--+--d--V.hollisaeV.damsela+-d+---+-----+--+--d--7动物试验将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5%氯化钠胨水，经37℃16～18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2～3d，将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责解释。本标准主要起草人周桂莲。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫

8、生部1994—03—18批准1994—09—01实施