egf-gastrin联用促进胰岛新生作用机制探析

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EGF/Gastrin联用促进胰岛新生作用机制探【摘要】目的：探讨EGF/Gastrin联用促进胰岛新生可能的作用机制。方法：选用Wister大鼠，一次性腹腔注射STZ(55mg.kg-1)诱导1型糖尿病模型。实验分3组：正常对照组、糖尿病组及EGF/Gastrin联用治疗组。EGF(111g.kg-1)/Gastrin(3ug.kg-1)每日一次，连续140o实验结束时检测各组大鼠的空腹血糖、血清Insulin及C肽等生化指标；进行HE染色、Insulin和PDX-1免疫组织化学。结果：EGF/Gastrin组大鼠空腹血糖明显低于糖尿病组(P16.65mmol.L-1者确定为1型糖尿病大鼠模型［5］。将成模的糖尿病大鼠随机再分为两组：糖尿病组和EGF/Gastrin组。正常对照组和糖尿病组给予PH8.OTris-cl缓冲液，EGF/Gastrin组给予EGF(lug.kg-1)(Invitrogen)/Gastrin(3ug.kg-1)(GenScriptCorporation),皮下注射，每日一次，连续14日o1.2标本采集实验结束时，采用10%水合氯醛(3ml.kg-1)麻醉动物，腹主动脉取血，离心后分离上层血清，保存于-20°C,用于各项生化指标的检测。处死大鼠后,立即切取胰腺组织，置于冰生理盐水中洗去残留血液，放入液氮中冷冻，而后置于-8(TC超低温冰箱保存；其余部分浸入10%中性福 尔马林固定液内固定，石蜡包埋切片，待组织学检查。1.3指标检测1.3.1一般状态观察各组大鼠的进食量、饮水量、排尿量、体重、尿糖及其它一般状态。1.3.2空腹血糖值禁食不禁水12h,鼠尾静脉采血，使用血糖测试仪分别于实验初、STZ注射后第7天、实验结束时检测。1.3.3血清Insulin及C肽含量取冻存血清，放射免疫法检测并评估胰岛功能，Insulin放免试剂盒由华西糖尿病科技开发研究所提供。1.3.4HE染色对已制备好的胰腺组织石蜡切片进行HE染色，观察糖尿病组胰岛破环情况及EGF/Gastrin组胰岛恢复情况。1.3.5免疫组织化学染色采用S-P法，兔抗大鼠PDX-1多克隆抗体（SantaCruz）,小鼠抗大鼠Insulin单克隆抗体（北京博奥），观察各组大鼠Insulin和PDX-1在胰腺组织中的表达变化。结果判定：以胞质或胞核出现棕黄色颗粒为阳性表达细胞，并进行半定量分析，即每组随机选取10个含胰岛的视野（X400）,使用Image-Proplus6.0图像采集软件分析系统（OLYMPUS日本），计算出阳性细胞占整个胰岛细胞的面积比（%）,并进行统计学处理。1.3.6统计学处理采用SPSS12.0统计软件，应用方差 分析处理数据。2结果2.11型糖尿病大鼠模型实验组30只大鼠有26只达到成模标准，成模率为87%O大鼠经STZ诱导24h后即表现出进食量、饮水量及排尿量增加；并且逐渐出现消瘦、毛色失去光泽、毛发凌乱、精神状态差、活动减少等症状。2.2空腹血糖变化糖尿病组大鼠的空腹血糖值显著高于正常对照组（P