超声辅助vegf165转染骨髓间充质干细胞的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果超声辅助VEGF165转染骨髓间充质干细胞的实验研究作者：汪涛　季军　周文　凌庆【关键词】超声摘要：目的：探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究。方法：采用超声辅助电穿法，将VEGF165基因的质粒PEGFP-C1转染至骨髓间充质干细胞，转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果：超声辅助转染5h后可见细胞内有GFP表达，10h后可达高峰。结论：

2、VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后，骨髓间充质干细胞内有GFP表达，提示细胞转染成功，骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。关键词：血管内皮生长因子；间充质干细胞；绿色荧光蛋白；转染ExperimentalStudyonVEGF16TransfectionofMedullaMSCsbyUltrasoundAbstract：Objective:TostudythefeasibilityofmedullaMSCsdifferentiationdirectionallytoendothelia

3、lcells.Method:ObservetheexpressionofgreenfluorescenceprotEin(GFP)inmedullaMSCsaftertransfectionofVEGF16vector,PEGFP-C1byultrasoundunderthefluorescence:GFPexpressionwasseenhours课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定

4、实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果aftertransfection,andreachedthepeak10hours:ItispossiblethatmedullaMSCscouldbedifferentiatedirectionallytoendothelialcellsafterthetransfectionofVEGFvector.Keywords:VEGF；Mesenchymalstemcells；GFP；Transfection

5、　　缺血性心脏病是冠状动脉狭窄或闭塞导致的心肌缺血从而影响心脏功能的一类疾病。随着组织工程学的发展，构建组织工程化血管内皮细胞可以为血管内皮损伤的临床修复提供一个新途径。间充质干细胞是一种分化程度低，具有多向分化潜能的成体干细胞。血管内皮生长因子是新近发现的血管内皮特异性生长因子，是一类分子量为34～45KD的糖蛋白。因此，VEGF有可能诱导MSCs定向分化为血管内皮细胞。本实验用携有VEGF基因的质粒PEGFP-C1，采用超声辅助电穿法转染MSCs。　　1材料与方法1．1材料：家狗骨髓MSCs由本

6、实验室分离，大肠杆菌KH5X由第一军医大学临床解剖研究所提供，超声治疗仪US-700。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果1．氯化钙制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞：直接蘸取大肠杆菌DH5X，在无菌琼脂板表面划线，于37℃培养16h。挑一单菌落加入50mlAMP-LB培养基中，37℃200r/mi

7、n振摇培养过夜。取50ul菌液加5ml培养基，37℃、200r/min振摇2～4h。在无菌条件下将细菌转移至无菌预冷的50ml聚丙烯管中，在冰上放置10min，使培养物冷却至0℃。与4℃以4000r/min离心10min，以加收细胞。倒出培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。每50ml初始培养物用2ml冰预冷的/LCaCl2重悬细胞沉淀，在4℃下存放备用。1．菌轻轻混匀，冰上放置30min，42℃水浴90s使细胞热休克，立即放回冰上，2min后加入45ul室温状态的LB培养基，37摄

8、氏度、200r/min摇菌，1000r/min离心10min，100ulLB培养基重悬菌液，涂于AMP+的LB板上，37℃培养过夜，挑取1个阳性克隆，37℃摇菌12h。鉴定：取1ml菌液，用小量质粒提取试剂盒提取质粒。VEGF165基因插在PEGFP-C1质粒的HINDⅢ和EVORI之间的多克隆位点。取少量的质粒，HINDⅢ和EVORI双酶切后，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。1．PEGFP-VEGF165转染MSCS将的添加液加至细胞转染液中，混匀，孵育至室温备用。消化传代