山羊黑素皮质素受体—3基因转录水平差异分析

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果山羊黑素皮质素受体—3基因转录水平差异分析　　引言课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　【研究意义】黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊和黔北麻羊是贵州省的优良山羊品种，南江黄羊是四川南江县选育而成的肉用型山羊品种，这5个山羊品种对重峦叠嶂、山高谷

2、深、沟壑纵横的贵州高原山地有很好的适应性，可常年放牧，且育肥性能好，繁殖力强，肉质优良，是贵州存栏量较大的山羊品种。研究其生长及肉质性状的相关基因，对于发展贵州羊肉产业具有重要意义。【前人研究进展】黑皮质素受体基因家族有5个成员，MC1R、MC2R、MC3R、MC4R和MC5R。其中，MC3R是由单一外显子编码的包含323个氨基酸残基的一种跨膜G蛋白耦联受体，是MCR中最晚被克隆和鉴定的一个，具有降低摄食频率控制采食行为、增加能量消耗调节能量平衡、减少脂肪贮量调节体重的功能，因此，MC3R基因常作为体重标记的候选基因。苏毅研究发现鸡MC3R基因142SNP位点与屠宰前体重和屠体重、胸肌重

3、、腿肌重及腹脂重显著相关；王彦等研究发现鸡MC3R基因A1424G突变与屠体性状、腹脂重、皮下脂肪显著相关；李世鹏等研究发现石岐肉鸽MC3R基因T91G突变与活重、屠体重、全净膛重显著相关；杜鹏等研究发现比格犬MC3R基因T167A碱基置换对犬体重有显著影响；张轶博和巴彩凤研究发现北方实验用犬MC3R基因A167T位点突变与其体重、胸围和体重指数等显著相关；薛倩等从京海黄鸡的MC3R基因编码区序列检测到6个SNP位点，得到5种单倍型和11种单倍型组合，不同单倍型组合间京海黄鸡屠体性状存在显著或极显著差异；张心扬等在肉鸡高、低脂双向选择品系的研究中发现MC3R基因C273T突变对第六世代和

4、第八世代两个群体的7周龄体重和屠体重有显著联盟影响。【本研究切入点】目前国内外关于山羊生长和肉质相关基因的研究较多，但鲜见MC3R基因在不同山羊品种及其不同组织中转录水平的研究报道。【拟解决的关键问题】采用双标准曲线和Taqman实时荧光定量PCR对黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊和南江黄羊5个山羊品种的心脏、肝脏、肺脏、肾脏、背最长肌、半膜肌和皮下脂肪中MC3R基因转录水平进行检测，并分析MC3R基因在不同品种及组织间的表达差异，为深入研究山羊MC3R的作用部位、特点及功能提供理论参考。　　1材料与方法　　1.1试验材料课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，

5、硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　黔东南小香羊、贵州白山羊、贵州黑山羊、黔北麻羊、南江黄羊的心脏、肝脏、肺脏、肾脏、背最长肌、半膜肌、皮下脂肪等组织采自贵州省雷山县和榕江县。每个品种4只，雌雄各2只，年龄5～7月龄，体重14～1kg/只。总RNA提取试剂Trizol购自上海英骏生物技术有限公司，标准品PCR试剂盒GeneSolution×TaqMasterMix购自上海硕盟生物科技有限公司，胶回收试剂盒购自天根生化科技有限公司

6、，逆转录试剂盒ReverTraAceqPCRRTKit和实时荧光定量PCR试剂盒RealtimePCRMasterMix购自东洋纺生物科技有限公司。主要仪器设备：H1650-W台式微量高速离心机，EppendorfCentrifuge415D离心机，UltraPureUF除热源型超纯水机，FTC-3000实时荧光定量PCR系统，EppendorfResearchPlus移液器，MiniCentrifuge八联管离心机，BIO-RADPowerpacBasic电泳仪系统。　　1.引物及探针　　根据NCBI公布的山羊MC3R基因序列及β-actin基因序列設计标准品引物、定量引物及TaqMa

7、n探针，并由上海捷瑞生物工程有限公司合成。其中，探针的5'端标记FAM基团，3'端标记TAMRA基团。　　1.总RNA提取及cDNA合成　　用InvitrogenTrizolRNA提取试剂盒提取各组织样品的总RNA，再用ReverTraAceqPCRRTKit逆转录试剂盒制备cDNA。逆转录过程：～μg总RNA加RNase-freeddH2O至μL，混匀，6℃变性min，冷却。再加5×RTμL，EnzymeMixμL，RTPrime