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时间:2018-12-25
《抗sars冠状病毒s1蛋白n端249至667的单克隆抗体的制备与》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、抗SARS冠状病毒S1蛋白N端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定作者:温坤1;梅亚波1;丘立文1;廖志勇1;袁国勇2;车小燕1 (1第一军医大学珠江医院中心实验室,广东 广州510282;2香港大学微生物学系,香港)摘要:目的 在获得了具有免疫原性的SARS冠状病毒S1蛋白片段的基础上,制备和鉴定特异性抗该段S1蛋白单克隆抗体(mAb)。方法 原核表达含S蛋白受体结合区的SARS冠状病毒S1蛋白片段S1c(N端249-667氨基酸残基),其免疫原性经SARS病人恢复期血清鉴定后免疫BALB/c小鼠,按常规方法制
2、备单克隆抗体,并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果 筛选出3株特异性针对SARS冠状病毒S1蛋白N端249-667的mAb杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定1株为IgG1,2株为IgG2a,经免疫荧光鉴定与人冠状病毒株229E和OC43无交叉反应。结论 获得3株抗SARS冠状病毒S蛋白受体结合区特异性单克隆抗体,为建立新的SARS冠状病毒检测方法的和进一步研究S蛋白的功能奠定了基础。关键词:SARS冠状病毒;单克隆抗体;刺突蛋白;受体结合区Preparationandcharacterization
3、ofmonoclonalantibodiesagainstS1domainatN-terminalresidues249to667ofSARS-associatedcoronavirusS1proteinWENKun1;MEIYa-bo1;QIULi-wen1;LIAOZhi-yong1;YuenKwok-yung2;CHEXiao-yan11CentralLaboratory,ZhujiangHospital,FirstMilitaryMedicalUniversity,Guangzhou510282,China;2De
4、partmentofMicrobiology,UniversityofHongKong,HongKong,China.Abstract:Objective Toprepareandcharacterizemonoclonalantibodies(mAbs)againstS1proteinofsevereacuterespirato-rysyndrome(SARS)-associatedcoronavirus(SARS-CoV).Methods 6-His-taggedrecombinantfragmentatN-ter
5、minalresidues249to667ofSARS-CoVS1proteinincludingS-proteinreceptor-bindingdomainwasexpressedinE.coli.Theim-munogenicityofthisS1domainwasidentifiedandusedtoimmunizeBALB/cmicefortheproductionofhybridomas.TheidentificationofthemAbsagainstthisS1domainwasperformedusing
6、indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA),indirectimmunofluorescenceassay(IFA)andWesternblotting,respectively.Results ThreehybridomasproducingmAbsspe-cifictotheS1domainwasobtained,witharelativemolecularmassof48500.Noneofthe3mAbswerereactivewithhumancoronavir
7、uses229EandOC43.TwoofthemAbswereIgG2aisotype,andtheotherwasIgG1.Conclusion Thisisthefirstre-portofmAbsproducedagainstS-proteinreceptor-bindingdomainofSARS-CoV.The3S1-specificmAbsmaybeusefulforfurtherstudyofthefunctionoftheSproteinandfordiagnosisofSARS-CoVinfectio
8、n.Keywords:severeacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus;SARS-CoV;monoclonalantibody;spikeglycoprotein;receptor-bindingdomainReceived:2004-01-03T
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