中药药理实验方法学

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1、药理学实验基础知识开课目的：培养科学思维方法，严肃的科学态度，提高分析问题解决问题的能力。掌握基本实验操作技能和实验方法，为今后科学研究打下基础。要求：工作服、仪器领取、卫生打扫、动物处理。实验动物分类：按种系分三种情况A、按遗传学控制方法分为4类：近交系动物、突交系动物、F1杂种动物、封闭群动物。B、未经遗传学控制的杂种动物。C、按微生物学控制方法分5类：无菌动物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁动物、普通动物。我国将实验动物分为四级：一级动物：普通动物（CV）---普通自然环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和一般实验用）二级动物：清洁动物（CL）---用于一般动物实验，除一

2、级标准外，还需要不带有动物传染病病原体。三级动物：无特殊病原体动物（SPF），在CL基础上还需不带有干扰实验的微生物。按纯系动物的要求进行繁殖，在隔离器内或层流室内饲养，只有一些不致病的细菌丛，没有致病的病原体。四级动物：无菌动物（GF）和悉生动物（GN）。GF：全封闭无菌条件下饲养的纯系动物，体内不带任何微生物和寄生虫（包括绝大部分病毒）；GN：要求在无菌动物体内植入一种或数种已知的微生物。三、四级动物要求高，价格贵，适用于特殊目的和要求的实验。实验动物的选择：a.选对与人的机能、代谢、结构、疾病特点和机能反应相近似的实验动物。药物的反应与人的反应相似的动物。b.选用遗传背景明

3、确，模型指标显著且稳定，解剖、生理特点符合实验目的的实验动物。NIH小鼠BALB/c小鼠远交系小鼠，国际上广泛通用的实验动物，已选为某些生物制品检定的法规动物。近交系小鼠，毛色黑色；补体活性高；较易诱发免疫耐受性；对结核杆菌敏感；干扰素产量高。是肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究常用的品系。C57BL/6J小鼠：近交系小鼠，乳腺肿瘤发生率低，但对致癌因子敏感。肺癌发病率雌性26％，雄性29％。对放射性照射极为敏感。用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究。BALB/c-nu裸鼠：无毛，裸体，T淋巴细胞缺损，可研究免疫功能和病毒细菌寄生虫感染机制等。SD大鼠Wistar

4、大鼠ＳＤ大鼠：远交系大鼠，对呼吸道疾病抵抗力强，对性激素刺激性高，多用于生理、营养、安全性试验。Wistar大鼠：远交系大鼠，抗病力强，自发性肿瘤发病率低，多用于肿瘤、免疫、药理、内分泌。豚鼠对各种致病菌和病毒敏感，对组胺类药物有高度敏感性，自身不能合成维生素，易于过敏，耳蜗管对声波敏感，缺氧耐受性强，血清中补体丰富，皮肤对毒物刺激敏感等。新西兰兔家兔血清量较多，胸淋巴结明显，耳血管粗大，诱发性排卵，眼球大，发热反应典型恒定，对许多致病菌和病毒敏感，颈部神经血管和胸腔适合做急性心血管实验，皮肤对刺激反应敏感等。Beagle犬果蝇蚕猴小鼠：常用于药物筛选、急性毒性实验。价格便宜，繁

5、殖周期短，易得。（18~22g）大白鼠：常用于抗关节炎实验、利胆实验、子宫实验、长期毒性实验（150~200g）豚鼠：研究平喘药和抗组胺药常用，对组胺特别敏感。毒理学中过敏实验（300~500g）家兔：常用于观察药物对呼吸、心脏、血管、肠肌运动的影响，热源检查、解热实验；雌兔用于避孕药研究和子宫实验。（1.5~2.5Kg）犬：常用于慢性实验如高血压、胃瘘、肠瘘、冠脉流量，还有长期毒性实验。其他动物：鸽子、蛙类、果蝇、蚕、猴、猫、鸭等。分组方法：分层分组法---按性别、体重、测定指标（如基础体温、痛阈）先分层，再分组；随机数字表法：按随机数字表来分组。编号：标记常用苦味酸（3%~5

6、%）、中性品红（0。5%）、硝酸银（2%）；方法见书，较大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈部或将特制的铝牌固定在耳壳上。取血方法：小鼠、大鼠---①断尾、②眼底（内眦球后静脉丛，小鼠可取0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc)、③断头、颈动脉取血。兔--①耳缘静脉，②心脏，③股动脉犬--①后肢外侧小隐静脉，②前肢背侧皮下头静脉，③耳缘静脉豚鼠--①耳缘切割，②心脏穿刺。常用抗凝剂①草酸钾饱和液2滴于试管中，80度以下烘箱烘干，可抗凝3~5ml血液。若测定钾、钙含量的不用。②肝素1%肝素0.1ml于试管中，80~100度烤干，可抗凝5~10ml血液③枸橼酸钠3.8%枸橼酸

7、钠1份，可抗凝9份血液。血压实验用5~7%的枸橼酸钠抗凝。实验报告或论文的书写实验报告格式：题目、目的、材料、方法、结果（表或图）、讨论、结论。论文书写格式题目、文摘、关键词、序、实验材料、方法、结果（表或图）、讨论（含结论）。参考文献常用动物的捉拿和给药方法捉拿小鼠、大鼠、豚鼠的捉拿方法基本一致。家兔抓背部皮肤，另一只手托起臀部。狗用狗头夹夹住颈部后再抓。给药：途径--口服或灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射。静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后肢小隐静脉）、豚鼠（后脚