化妆品微生物检验方法

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1、WORD资料可编辑一、总则1.范围本规范规定了化妆品微生物检验的基本要求。本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。2.仪器和设备2.1天平。2.2高压灭菌器。2.3振荡器。2.4三角瓶，250mL。2.5玻璃珠。2.6琉璃棒。2.7刻度吸管，1mL、10mL。2.8研钵或均质器。2.9恒温水浴箱。3.培养基和试剂3.1生理盐水成分：氯化钠8.5g蒸馏水加至1000mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa(121℃15lb)20min高压灭菌。3.2SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化钠5g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖

2、1g吐温807g蒸馏水1000mL制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3分装，103.43kPa(121℃15lb)20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。3.3灭菌液体石蜡。3.4灭菌吐温80。4.样品的采集及注意事项4.1所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。4.2供检验

3、样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。4.3接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。4.4若只有一个样品而同时专业整理分享WORD资料可编辑需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。4.5在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。4.6如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种

4、及被检样品应保存一个月。5.供检样品的制备5.1液体样品5.1.1水溶性的液体样品，可量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，如样品少于10mL，仍按10倍稀释法进行。如为5mL则加到45mL灭菌生理盐水中，混匀后制成1：10检液。5.1.2油性液体样品，取样品10mL,先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80,在40℃～44℃水浴中充分混合，制成1：10检液。5.3固体样品称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10的检液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1

5、min～2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加入10mL灭菌液体石蜡，10mL吐温80,70mL灭菌生理盐水，均质3min～5min。二、菌落总数1.范围本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。本规范适用于化妆品菌落总数的测定。2.定义本规范采用下列定义菌落总数（Aerobicbacterialcount）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g(1mL)检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行

6、卫生总评价的综合依据。3.仪器和设备3.1三角瓶，250mL。3.2量筒，200mL。3.3pH计或精密pH试纸。3.4高压灭菌器。3.5试管：15×150mm。3.6灭菌平皿：直径9cm。3.7灭菌刻度吸管，10mL、1mL。3.8酒精灯。3.9恒温培养箱：36℃±1℃。3.10放大镜。4.培养基和试剂4.1生理盐水：见总则中3.1。专业整理分享WORD资料可编辑4.2卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基4.2.1成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温807g蒸馏水1000mL4.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80,将其他成

7、分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐温80,混匀，调pH值为7.1～7.4,加入琼脂，103.43kPa(121℃15lb)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。4.30.5%氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenylterazoliumchloride,TTC）成分：TTC0.5g蒸馏水1000mL溶解后过滤，103.43kPa(121℃15lb)20min高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置4℃冰箱备用。5.操作步骤5.1用灭菌吸管吸取1：10稀释的检液2mL,分别注入到两个灭菌平皿内，每