水产微生物学实验

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1、水产微生物学实验实验一微生物基本操作技术（2学时）一、教学目标与基本要求掌握微生物实验中常用的基本操作二、实验内容实验报告思考题1、玻璃器皿清洗和包装有哪些注意事项？2、细菌接种时有哪些注意事项？实验二细菌形态观察(2学时)一实验目的1、掌握无菌操作技术2、掌握细菌涂片的制作技术；3、掌握显微镜特别是油镜的原理和使用方法；4、掌握生物科学绘图的方法。二实验器材1、器材：香柏油、油镜洗液、显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、小滴管、培养皿、酒精灯。2、培养基和试剂：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌斜面菌种。三操作步骤1、细菌

2、涂片的制作(1)取菌用无菌操作取菌。(2)涂片将带菌的液滴涂均匀。应先在载玻片中央滴一滴生理盐水或蒸馏水，然后用接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂抹成适当大小的薄层。（无菌操作）(3)干燥涂片最好在室温中自然干燥，必要时，可将标本面向上，在火焰高处烘干，切勿靠近火焰，以免标本干焦、菌体变形。(4)火焰固定将已干燥的标本片涂面向上，使背面在酒精灯火焰上以钟摆速度通过三次，使固定后的标本片触及皮肤时的稍感烧烫为度，但决不能在火焰上烧烤，否则，菌体形态毁坏。2．显微镜观察(1)低倍镜观察将标本玻片置于载物台上，用标本夹夹

3、住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。用4X或10X物镜观察找到合适的观察目标。(2)高倍镜观察在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，换用40X观察。(3)油镜观察在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加滴香柏油，从侧面注视，用粗调节器将筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。将聚光器升至最高位置并开足光圈，若所用聚光器的数值孔径值超过1.0，还应在聚光镜与载玻片之间也加滴香柏油，保证其达到最大的效能。调节照明使视野的亮度合适，用

4、粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。3、生物科学绘图绘图时用铅笔以线条构成物体大约轮廓，或以“点”来表现物体，组成画面；或者在用线条构成物体的轮廓后，再用“点”的疏密来表现组织物体的层次结构紧密等。实验报告1、绘制油镜下观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的细菌形态。2、思考题涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样？使用油镜时，为什么必须用香柏油？一、实验教学目标基本与要求1、明确培养基的配制原理。2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。二、实验内容1、介绍培养基的配制原理和方法步骤2、动手

5、称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养基等。实验三培养基的制备三、实验材料三实验器材1、溶液或试剂：牛肉膏，蛋白质，NaCl，琼脂，1mol/LNaoH，1mol/LHCl；2、仪器或其他用具：试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养其也装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，PH试纸（PH5.5-9.0），棉塞，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、实验内容牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlpH7.4-7.6固体培养基：添加1.5-2%琼脂半固体培养基：添加0.5%琼脂四、实验内容四

6、、培养基的配制：同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。操作图示：称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。2.配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。3.调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH

7、试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5.分装将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。

8、高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。四、实验报告记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。五、问题和思考l．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?2．培养基配制完成后，为什么必