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1、学生毕业论文题目：复合诱变选育碱性蛋白酶高产菌株18复合诱变选育碱性蛋白酶高产菌株摘要以枯草芽孢杆菌为出发菌株，通过紫外线和亚硝酸钠复合诱变，筛选碱性蛋白酶高产突变株，并进行液体发酵筛选试验。从大量突变株中进行筛选，获得1株遗传性稳定的碱性蛋白酶高产突变株D-5，其酶活力由出发菌的2.055，提高到7.369，提高258%。关键词：枯草芽孢杆菌；碱性蛋白酶；诱变育种CompositemutagenesisbreedinghighalkaliproteasestrainAbstractWithbacillussubtilisstrainforstarting,throughtheul
2、travioletrayandsodiumnitritecompositemutagenesis,screeningalkaliproteasehighyieldmutations,andsolidstatefermentationscreeningtest.Fromalargenumberofmutationsinscreening,get1strainofgeneticstabilityofthealkaliproteasehighyieldmutationsD-5,theenzymeactivityofthebacteriaby2.055,risingto7.369,incr
3、easedby258%.Keywords:bacillussubtilis;Alkaliprotease;Mutationbreeding181引言41.1.1碱性蛋白酶定义41.1.2简介41.2碱性蛋白酶生产菌种51.3碱性蛋白酶的应用51.3.1洗涤剂51.3.2制革业51.3.3纺织业51.3.4水解液制造51.3.5水产加工51.3.6感光胶片工业51.3.7医学51.4碱性蛋白酶的作用机理及影响因素61.4.1作用机理61.4.2影响因素61.5本实验研究意义62材料与方法62.1实验材料62.1.1菌种62.1.2培养基72.1.3实验所用试剂72.1.4实验所用器材
4、82.2实验方法82.2.1枯草芽孢杆菌活化82.2.2孢子悬浮液的制备82.2.3物理诱变—紫外线诱变82.2.4化学诱变—亚硝酸钠92.2.5碱性蛋白酶活力测定—Folin酚法103．结果与分析143.1紫外线诱变筛选结果143.2亚硝酸钠诱变筛选结果143.3致死曲线143.3.1紫外线诱变结果143.3.2亚硝酸钠诱变结果154遗传稳定性研究15结论15参考文献18181引言随着遗传学和分子生物学领域的飞速发展,许多新型复杂的技术被应用于菌种选育,如原生质体融合育种技术和基因工程育种技术等,但是诱变育种技术仍是提供菌株生产能力的重要有效手段。它获得的正突变率相对较高,可以得
5、到多种优良突变体和新的有益基因类型。另一方面,诱变育种存在一定的盲目性和随机性,在实际应用中,研究者应根据出发菌株及实验室条件等具体情况来选择合适的诱变方法。本实验室将物理因子和化学因子结合起来对多种酵母菌株进行复合诱变,均得到了理想菌株。此外,我们正在尝试反复采用几种诱变因子进行多次诱变,以期得到更为理想的菌株。1．1碱性蛋白酶概述及简介1.1.1碱性蛋白酶定义碱性蛋白酶是在碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类，最适值pH为9~11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类。是商品蛋白酶中应用最速度快、收效显著和方法简便等优点,因此,在科学广、产量最大的一类蛋白酶,是商业上非常重要的实验和生产上
6、都得到了广泛的应用,目前仍然是最主酶类。1.1.2简介早在1945年瑞士Dr,Jaag等发现微生物碱性蛋白酶便开创了碱性蛋白酶应用的新纪元，使其有可能工厂化生产，更可能广泛用于洗涤剂和皮革脱毛。在我国，60年代末选育出产碱性蛋白酶的2709菌并于1971年投产，目前，它已成为研究比较深入的一种酶类，同时也是酶制剂工业的主要产品。近几年来，由于酶制剂厂和洗涤剂工业迫切要求品种生产碱性蛋白酶，故它的发展很快并研制出了一批产酶量较高的菌株，如C1213地衣芽抱杆菌、B45嗜碱性短小芽抱杆菌、53-G38-6地衣芽抱杆菌,PH4一18。地衣芽抱杆菌等。1.2碱性蛋白酶生产菌种碱性蛋白酶广泛
7、存在于细菌、放线菌和真菌中，其中以芽孢杆菌属的碱性蛋白酶研究的最深入，本次实验所用菌株为枯草芽孢杆菌。目前,18国内外对碱性蛋白酶产生菌株的筛选研究已经比较深入。采样的自然环境,从盐碱性的土壤、湖泊扩展到海洋等极端环境。碱性蛋白酶广泛存在于细菌、放线菌和真菌中,主要的种属有枯草芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、马铃薯芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、黏质赛氏杆菌、节杆菌属、假单胞菌属、赫曲霉、萨氏曲霉、硫曲霉、蜂蜜曲霉、立德链霉菌、费氏链霉菌、灰色链霉菌
