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1、微生物及发酵工程摘要微生物是发酵工程的灵魂,近年来,对于发酵工程的生物学属性的认识愈益明朗化,发酵工程正在走近科学。人们熟知的利用酵母菌发酵制造啤酒、果酒、工业酒精,乳酸菌发酵制造奶酪和酸牛奶,利用真菌大规模生产青霉素等都是这方面的例子。本文主要讲述了微生物发酵工程技术及新的研究方向。关键词微生物发酵历史发酵技术应用一、微生物工程的发酵历史发酵工程[1]是指采用工程技术手段,利用生物(主要是微生物)和有活性的离体酶的某些功能,为人类生产有用的生物产品,或直接用微生物参与控制某些工业生产过程的一种技术。20世纪20年代,酒精、甘油和丙酮等发酵工程,属于厌氧发酵。从那时
2、起,发酵工程开始在不断地发展和完善。 20世纪40年代初,随着青霉素的发现,抗生素发酵工业逐渐兴起。由于青霉素产生菌是需氧型的,微生物学家就在厌氧发酵技术的基础上,成功地引进了通气搅拌和一整套无菌技术,建立了深层通气发酵技术。它大大促进了发酵工业的发展,使有机酸、微生素、激素等都可以用发酵法大规模生产。 1957年,日本用微生物生产谷氨酸成功,如今20种氨基酸都可以用发酵法生产。目前,代谢控制发酵技术已经应用于核苷酸、有机酸和部分抗生素等的生产中。 20世纪70年代以后,基因工程、细胞工程等生物工程技术的开发,使发酵工程进入了定向育种的新阶段,新产品层出不穷。
3、 20世纪80年代以来,随着学科之间的不断交叉和渗透,微生物学家开始用数学、动力学、化工工程原理、计算机技术对发酵过程进行综合研究,使得对发酵过程的控制更为合理。在一些国家,已经能够自动记录和自动控制发酵过程的全部参数,明显提高了生产效率。二、微生物发酵工程[2]的内容(1)、菌种的选育方法:A、从自然界中先分离出相应的菌种;B、利用诱变筛选出符合生产要求的优良菌种;C、利用基因工程、细胞工程的方法构建工程细胞或工程菌。例:可将人工合成的人的胰岛素基因与大肠杆菌的质粒结合,形成重组DNA,再把重组DNA导入大肠杆菌细胞内形成工程菌。通过筛选则可培养出能生产人的胰岛
4、素的菌种。(2)、培养基的配置及原则:A、根据不同的菌种,选择不同的材料配制培养基。B、配制的培养基应满足微生物在碳源、氮源长因子、水、无机盐等方面的营养要求,并为微生物提供适宜的PH。C、培养基的营养要协调,以利于产物的合成。D、培养基在满足微生物的营养需求的基础上应尽量降低生产成本,以得到更高的经济效益。(3)、灭菌及原因:在发酵过程中如混入其他微生物,将与菌种形成竞争关系,对发酵过程造成不良影响。举例:如果在谷氨酸发酵过程中混人放线菌,则放线菌分泌的抗生素就会使大量的谷氨酸棒状杆菌死亡。如果在青霉素生产过程中污染了杂菌,这些杂菌则会分泌青霉素酶,将合成的青霉素
5、分解掉。(4)、扩大培养和接种:扩大培养是将培养到对数期的菌体分开,分头进行培养,以促使菌体数量快速增加,能在短时间里得到大量的菌体接种:接种过程要注意防止杂菌污染。(5)、发酵过程:发酵产物主要在菌体生长的稳定期产生。在发酵过程中随时取样检测培养液中细菌数目、产物浓度以了解发酵进程,及时添加必需的培养基成分来延长菌体生长稳定期的时间,以得到更多的发酵产物。发酵生产中温度、pH、溶氧量等对发酵过程有重大影响。(6)、分离提纯发酵产物不同,分离提纯的方法会有所不同。一般方法是:代谢产物:蒸馏、萃取、离子交换等方法。菌体本身:过滤、沉淀。三、微生物发酵过程的多种培养技术
6、1、分批培养分批发酵是一种封闭培养系统,含有初始限制量的基质的发酵方式,菌体接种到培养基后除了气体流通外,发酵液始终留在生物反应器内。分批培养过程中微生物生长一般可以分为四个阶段:延滞期、对数生长期、衰减期、稳定期,在接种后一段时间,细胞数目和菌体量不变,因菌体对新的生长环境有一个适应过程,所以工业生产从发酵产率和发酵指数以及避免染菌考虑,应尽量缩小延滞期,扩大生长期。延滞期过后进入对数生长期,如果条件良好,营养充分,微生物会以最大生长速率生长[3],经过一段时间,由于养分的消耗和微生物产物的分泌,生长速率逐渐减速直到停止,从对数生长期到稳定期有一个过渡,称为衰减期
7、,衰减期的长短取决于菌对限制性基质的亲和力,例如对基质的亲和力高(具有低Ks值),则衰减期很短,反之,则长[4];当生长率下降为零时,便进入稳定期,但是稳定期菌体代谢仍然十分活跃,有许多次级代谢产物在此时合成。分批培养的产物大概可以分为两种:(l)与生长联动的产物;(2)与生长不联动的产物。前者相当于初级代谢产物,由正在生长的细胞合成,后者相当于次级代谢产物,多在稳定期中合成[5],若所需产物不同,要选择不同的分批发酵工艺,对于产物是细胞本身,可采用能支持最高生长量的培养条件;对于产物是初级代谢产物,可设法延长与产物关联的对数生长期;对于次级代谢产物,可缩短对数