磁分离酶联免疫技术检测fsh、lh和hcg论文

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1、磁分离酶联免疫技术检测FSH、LH和hCG论文.freel、550nm、630nm同时检测，程序编辑，曲线绘制，微机控制，打印输出)，磁性分离器和混匀器(由北京倍爱康生物技术有限公司提供)。2.2试剂FSH、LH和hCGSEROZYME试剂盒。内容包括：FITC和牛ALP标记鼠抗人hCG、FSH和LH单克隆抗体，FSH、LH和hCG系列标准液，磁分离试剂，清洗浓缩液，基质液，稀释缓冲液和终止液。2.3检测标本临床病人，空腹采血。2.4检测方法按试剂盒说明书进行操作。先绘制标准曲线，复管测定，用SEROZYME-I型酶联免疫定量测定仪对FSH、LH和hCG进行定量程序测定，自动绘制标准曲线，并

2、将数据贮存入相应的定量程序中。然后以同样方法检测待测标本，各管用仪器直接测定读数。分为4个步骤：(1)抗原抗体反应：加入待测血清及反应试剂37℃水浴保温15分钟，使其形成抗原抗体复合物。(2)磁性分离：加入磁分离试剂，使磁性颗粒与抗原抗体复合物结合，在磁场的作用下沉淀复合物，洗涤，沉淀弃去未反应的试剂。(3)显色反应：加入基质单磷酸酚酞，使结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，发生催化反应，产生有色物质酚酞，加入终止液，该液显桃红色。颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比。因此，可以借助于颜色反应的深浅来定量测定抗体或抗原的量。(4)读出结果：将已显色的标准管和测定管严格按操作程序在SE

3、ROZYME-I型酶联免疫定量测定仪上直接读取结果，每秒测一管。3结果3.1标准曲线(线性范围)各标准液浓度相对应的吸光度在仪器经对数处理后，线性良好。hCG浓度在0～500mIU/mL，FSH在0～150mIU/mL，LH在0～200mIU/mL范围内与吸光度成线性关系。3.2显色稳定性试验空白对照(底物液+终止液)和测定管(酶标抗体+底物+终止液)在加终止液后，在不同时间内(1分钟，5分钟，10分钟，20分钟，30分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，和24小时)观察其吸光度(550hm)变化。4讨论在双抗体夹心酶联免疫测定法(MAIA)中，分离游离型标记抗体和标记抗体-抗原复合物是一重

4、要环节。分离方法有多种，其中磁性分离技术具有分离完全而快速的优点，但因磁性抗体免疫试剂制备困难而限制了该技术的推广。瑞士Serono诊断中心发明这种磁性抗体免疫技术，称MAIA，为酶联免疫分析中磁性分离技术的推广和应用创造了条件。Serono磁性分离试剂用抗荧光素标抗体与直径1μm的粒子结合成为磁性微粒抗荧光素抗体，它是一种非同位素免疫检测系统。由于抗原抗体反应在液相中进行，不仅反应速度快，而且均匀，时间明显短于固相分离。我们对该方法在线性范围、显色稳定性、精密度和精确度等方面进行评价。结果显示：标准曲线范围较宽，重复性良好；仪器能储存前次测定的标准曲线数据，不需要每次作标准曲线，可以进行急

5、诊标本的检测，整个检测过程仅需1～2小时。我们在1天24小时不同时间内观察空白管和测定管的吸光度变化，结果为空白管吸光度的变异系数为0．023，测定管吸光度的变异系数为0．004。表明该方法以碱性磷酸酶作为标记物，单磷酸酚酞作为基质，酚酞呈色稳定，重复性较好。将三份不同浓度的标本作连续检测，观察其精密度，批内变异(n=10)：LH平均为2．26％，FSH为2．29％，hCG为2．85％；批间变异(n=5)：IM平均为6．6％，FSH为2．59％。同时，我们分别将不同浓度的LH和FSH加到标本中，作回收试验检测其精确性。结果：LH平均回收率为104．5％，FSH为93．5％。表明该方法具有较高

6、的精密度和精确度，能满足临床测定的要求。FSH、LH和hCG的磁性抗体免疫检测方法简单，包括孵育、分离、显色和测定四步连续进行，标准曲线绘制及计算结果自动程序化，检测速度快，每秒一管，显著地堤高了工作效率，满足医生和病人即刻测出结果的要求。仪器采用三波长同时检测，可消除试管因素的误差，也增大仪器量程5倍，达10个吸光度，溶液显色稳定。该项技术采用了非同位素的碱性磷酸酶作标记物，免除了对人体和环境有害的放射性物质污染。各项性能指标可与同位素标记的RIA相媲美。采用磁性抗体免疫试剂，开创了磁分离酶联免疫的实用技术，这将是一项很有广阔发展前途的检测方法。