苯甲醇对红细胞冻干前海藻糖负载红细胞影响研究

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1、苯甲醇对红细胞冻干前海藻糖负载红细胞影响研究【摘要】为研究苯甲醇对海藻糖负载红细胞的影响，在4℃条件下将红细胞孵育在浓度分别为10、30、50、100mmol/L的苯甲醇海藻糖溶液中24小时，用氰化血红蛋白试剂盒测定海藻糖负载红细胞的溶血率，用硫酸蒽酮法检测红细胞内海藻糖浓度水平。结果表明：在100mmol/L苯甲醇海藻糖溶液组，其红细胞内海藻糖浓度为72±12.98mmol/L，与其它各组相比，有显著统计学差异（p=0.000）；溶血率为17.99±3.75%，与其它各组相比，有显著统计学差异（p

2、=0.000）。结论：苯甲醇可提高海藻糖负载红细胞的负载率，随着苯甲醇浓度的升高红细胞海藻糖负载率也提高，100mmol/L的苯甲醇浓度为可用浓度。【关键词】苯甲醇EffectofBenzylAlcoholonTrehaloseloadingRedBloodCellsbeforeLyophilizationAbstractThisstudyedtoevaluatetheeffectofbenzylalcoholontrehaloseloadingredbloodcells(RBCs).TheRBCsm

3、ol/Lconcentrationsofbenzylalcoholtrehaloesolutionat4℃for24hours.ThehemolysisrateofloadedRBCsoglobinkit,theintracellulartrehaloselevelethod.Theresultsshomol/Lbenzylalcoholmol/L，paredmol/L,thestatisticaldifferenceolysisrateofloadedRBCsingroupmol/Lofbenzyla

4、lcoholmol/L,thestatisticaldifferencemol/LbenzylalcoholmaybeproperforloadingRBCs.Keyatol2007;15(4):882-884目前，输血已成为临床重要的治疗手段之一，据统计，90%的输血目的是为了补充红细胞。用现有的红细胞保存装备保存费用昂贵，不便运输，远远不能满足临床急救和突发事件或灾害事故的救援。冻干红细胞由于其性能稳定，可在常温下保存，保存时间长，保存费用低廉，易于再水化，输注方便，以固体干粉剂形式存在，体积小，便于

5、运输，克服了目前血液保存的局限性，因此冻干红细胞的保存已成为研究的热点。冻干红细胞的研究已有30多年的历史，进展缓慢.。2004年，Satpathy等［1］利用渗透非平衡原理和磷脂膜相变相结合原理将海藻糖导入到红细胞内。2005年，Satpathy等［2］将负载海藻糖的红细胞冰冻干燥，再水化后血红蛋白回收率达59%。这项研究，为冻干红细胞的临床应用迈出了重要一步。2005年，我们在Satpathy实验的基础上，改进某些实验方法，用海藻糖负载红细胞，并进行冻干保存研究，实验结果与Satpathy的实验结果接

6、近。在实验中我们发现，优化海藻糖负载红细胞技术，提高细胞内海藻糖浓度，是进一步提高冻干红细胞回收率的关键。苯甲醇为海藻糖负载红细胞的媒介，可大大提高红细胞海藻糖负载率，从而提高冻干红细胞血红蛋白回收率。材料和方法试剂海藻糖、蒽酮购自美国Sigma公司，三氯乙酸、浓硫酸分析纯购自北京化工厂，氰化血红蛋白试剂盒购自北京天来公司。苯甲醇（纯度＞98%，密度1.04535，分子量108.14，毒性LD50mg/kg）购自北京化工厂。仪器MP4R低温离心机（IEC，USA产品），723型分光光度计（上海第三仪器厂产

7、品），SL2数控层析冷柜（北京四环科学仪器厂产品）。制备浓集红细胞从解放军307医院取3人份新鲜全血，在4℃条件下，以329×g离心14分钟，弃上清及白膜（血小板及白细胞）；用等量PBS液清洗3遍，用530×g离心10分钟，弃上清，制成浓集红细胞。海藻糖负载红细胞以0.8mol/L的海藻糖溶液为原液，配制10、30、50、100mmol/L苯甲醇海藻糖溶液。实验以苯甲醇溶液浓度为准，分为10mmol/L组、30mmol/L组、50mmol/L组、100mmol/L组。将每份血均分于5小组，每组3个样品

8、，浓缩红细胞与苯甲醇—海藻糖负载液以1∶3体积比混匀。每个样品设立空白对照，红细胞与不同浓度的苯甲醇溶液以1∶3体积比混匀。样品放置在4℃SL2数控层析冷柜中，负载24小时。测定负载溶血率用氰化血红蛋白试剂盒，测定负载样品的吸光值，以2000转/分钟离心15分钟，测定上清的吸光值。溶血率为上清吸光值比负载样品的吸光值。细胞内海藻糖量的硫酸蒽酮法测定负载后的红细胞离心弃上清，用等渗的PBS清洗3遍，加入3倍体积的10%的三氯