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1、瘢痕灸对荷瘤及化疗小鼠肠道淋巴结及固有层淋巴细胞亚群的影响论文.freeloxibustiononPeyer’spatchandTcellssubsetsofintraepitheliallymphocyteoftumor-bearingmiceide.MethodThemucosalimmunedeficiencymodeladebyinsiteinoculatingC-26coloncarcinomainistrationofcyclophosphamide.Themiceoxibustionforseventeendaysafterinoc
2、ulation.TheareaofPeyer’spatcheasured,andTcellssubsetsofLaminaproprialymphocyte(LPL)munofluorescencetestandfloeter.ResultTumoror-bearinggroupidegroupsignificantly(P＜0.01).Thetumorinhibitionratioofcyclophosphamideor-bearinggroupdecreasedsignificantly.TheamountsofCD4+cellofLPLor
3、-bearinggroupandcyclophosphamidegroup.Scarring-moxibustioncouldsignificantlyincreasetheareaofPPandtheamountsofCD4+cellofLPL(P＜0.01,P＜0.05),oxibustioncanimprovethemucosalimmunedefectivecausedbytumorandcyclophosphamide.Keyoxibustion；mucosalimmunology；tumor；cyclophosphamide；mice
4、黏膜损伤是癌症常规治疗(即标准剂量化疗)中常见的毒副反应,临床又称黏膜炎。黏膜损伤不但会引起疼痛,严重影响患者的生活质量并降低治疗效果,还是患者并发感染的重要危险因素。因此,近年来黏膜炎越来越受到人们的重视。权威机构发表的报告认为,黏膜炎不仅是放化疗作用于上皮干细胞引起的局限于黏膜上皮的毒性反应,更是黏膜下的其他细胞和细胞外基质都参加的一个复杂的过程1。目前,有关化疗时小肠黏膜屏障功能的病理形态学研究已基本明确,但对于瘢痕灸治疗荷瘤机体化疗所致黏膜炎的黏膜免疫机制还未见报道。本研究以环磷酰胺多次灌胃的荷瘤小鼠为模型,研究瘢痕灸治疗化疗所致黏膜损伤
5、的黏膜免疫机制。1实验材料雌性BALB/c小鼠,3周大,75只,中国医学科学院实验动物研究中心提供,清洁级,体重(16±2)g,许可证号：SCXK(京)2000-0006。C-26结肠癌瘤株：中国医学科学院药物所韩锐研究员惠赠。FITC标记的抗小鼠CD3,PE标记的抗小鼠CD4,PE-cy5标记的抗小鼠CD8,eBioscience公司产品(购自晶美公司)。2实验方法2.1分组随机分为4组：假手术组、荷瘤模型组、环磷酰胺组、环磷酰胺加灸组,每组15只。2.2肿瘤细胞接种选取生长良好的C-26结肠癌瘤组织,按肿瘤(g)∶生理盐水(mL)为1∶3比例
6、匀浆,调整细胞数为5×107/mL。环磷酰胺组及环磷酰胺加灸组小鼠在麻醉状态下打开腹腔,将20μLC-26肿瘤细胞(共1×106)接种于盲肠浆膜下,缝合腹壁,造成荷瘤C-26结肠癌模型。假手术组在同样条件下开腹,盲肠浆膜下注射20μL生理盐水。2.3给药及施灸方法假手术组从接种后至处死为止,每日0.9%氯化钠溶液200μL灌胃。环磷酰胺组及环磷酰胺加灸组从接种后第1－12日,给予0.9%氯化钠溶液200μL灌胃,第13－17日,每日给予环磷酰胺200μL(总计量为5μg)灌胃。在此基础上环磷酰胺加灸组于造模接种次日开始在小鼠背部正中线下1/3处(
7、相当于命门穴处)施治,施灸局部剃毛露出皮肤,使用艾绒制成半米粒大艾炷,放置于穴位相对部位,用线香点燃,每日1壮,连续施治17d。实验过程中荷瘤模型组、环磷酰胺加灸组小鼠各有1只死亡,环磷酰胺组小鼠有2只死亡,均死于肿瘤及化疗所致的恶液质。2.4检测指标与方法瘤重及抑瘤率的计算：打开腹腔,剥离肿瘤,称重。抑瘤率(%)＝(1－实验组的平均瘤重/假手术组的平均瘤重)×100%记录肠道集合淋巴结(PP结)面积,制备PP结淋巴细胞悬液：取出全部小肠,用含5%NCS的D-Hank’s液冲洗肠腔。肉眼观察PP结,记录个数和面积,并剪下PP结。用机械力挤压的方法
8、得到PP结淋巴细胞悬液,并用300目的尼龙网滤过,去除残留组织和杂质。小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL)的分离：预热的离心管中加入含有0.
