山慈姑体外抑菌活性的初步研究论文

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1、山慈姑体外抑菌活性的初步研究论文郭东贵王寒朱晓鹤周英【摘要】目的探讨山慈姑的体外抑菌活性。方法将山慈姑提取物经大孔树脂（D-101）分离得到4个组分A，B，C和D，用倍比稀释法测定其抑菌活性。结果金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）对组分D有很强的敏感性，MIC≤12.5mg/ml，对组分B有中等强度的敏感性，MIC为12.5～25mg/ml；白色念珠菌（Candidaalbicans，ATCC-10231）对组分B和组分D有中等强度的敏感性.freelg/ml，大肠杆菌（Escherichiacoli）对各组分的敏感性都较低，MIC

2、＞50mg/ml。结论山慈姑提取物B和D对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌具有较强的抑菌效果。【关键词】山慈姑体外抑菌倍比稀释法最低抑菌浓度山慈姑为兰科植物杜鹃兰Cremastraappendiculata(D.Don)Makino，独蒜兰Pleionebulbocodioides(Franch.)Rolfe或云南独蒜兰Pleioneyun-nanensisRolfe的干燥假鳞茎，前者习称“毛慈姑”，后二者习称“冰球子”［1］，主产于贵州、四川、云南等长江以南各省区。作为传统的中药材，山慈姑始载于唐《本草拾遗》，具有清热解毒、消肿散结的功效。本文旨在探讨山慈姑的

3、体外抑菌作用，为进一步开发利用山慈姑奠定基础。1材料与仪器1.1材料山慈姑由贵州信邦中药发展有限公司GAP种植基地提供。大孔树脂（D-101，天津化学试剂公司）。1.2试剂氯仿（AR，四川鸿鹤精细化工有限责任公司），醋酸乙酯（AR，四川鸿鹤精细化工有限责任公司），95％乙醇（AR，重庆川江化学试剂厂），蒸馏水（自制），无菌水（自制）等。1.3菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（Escherichiacoli）由中国微生物菌种保藏中心提供，白色念珠菌（Candidaalbicans）由广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心

4、提供。1.4培养基营养肉汤固体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，定容至1000ml，pH值调至7.0；沙氏固体培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，琼脂15g，定容至1000ml，pH调节5.0。液体培养基组成除了不加琼脂外，与相应的固体培养基相同。1.5仪器高低温恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），旋转蒸发仪（BUCHIR-200），SHZ-D（III）循环水式真空泵（河南省巩义市予华仪器有限公司），电子天平（OHAUS），净化工作台（上海市纯昱科学仪器有限公司），真空冷冻干燥机（LABCONCO），超低温冰箱(海尔)，

5、双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司TU-1901）。2方法2.1样品的制备取粉碎后的山慈姑100g，用70%乙醇浸提3次，72h/次，合并提取液，减压浓缩至适量，依次用氯仿、醋酸乙酯萃取后，取水层减压浓缩，浓缩液用95%乙醇溶解，过滤，滤渣以蒸馏水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇为流动相，D-101为固定相得到四组分，分别减压浓缩、冷冻干燥后得组分A（水洗脱物），B（25%乙醇洗脱物），C（50%乙醇洗脱物）和D（75%乙醇洗脱物）。2.2菌种培养金黄色葡萄球菌、大肠杆菌用营养肉汤培养基（组成成分见上）活化培养，白色念珠菌采用沙氏培养基

6、（组成成分见上）活化培养，分别将各菌种浓度调至OD600≈1［2］，备用。2.3最低抑菌浓度（MIC）的测定取A、B、C、D四组分各100mg溶于1ml无菌水中使其充分溶解后，用细菌过滤器过滤，取滤液0.3ml，用相应的液体培养基倍比稀释［3］成样品浓度分别为50，25，12.5mg/ml和6.25mg/ml。取稀释后的样品各300μl，分别加入活化的菌悬液30μl（OD600≈1）后培养16h，培养温度为：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为35℃，白色念珠菌为27℃。培养后分别取100μl均匀涂布在相应的固体培养基上，在各自的温度下恒温培养24h，并以相应溶剂作

7、对照，测定其最小抑菌浓度（MIC）［4］。3结果3.1实验结果山慈姑不同组分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的MIC结果见表1。表1山慈姑不同组分的最低抑菌浓度（略）3.2分析目前国内外尚无统一中草药对细菌的MIC标准，结合本实验结果，笔者参照同类实验［5］的标准作为判断指标，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌对山慈姑各组分表现出不同的敏感性：金黄色葡萄球菌对组分A和C的敏感性较弱，MIC＞50mg/ml；对组分B有较强的敏感性，12.5mg/ml＜MIC≤25mg/ml；对组分D有很强的敏感性，MIC≤6.25mg/ml。大肠杆菌对山慈姑各组分的

8、敏感性都较弱，MIC＞50mg/ml。白色念珠菌对组分A和C的敏感