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时间:2018-11-20
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1、Wistar大鼠EAE模型的制备作者:刘颖 刘华 辛晋敏 马太花 梁丽云 马存根 摘要目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达,探讨山西医科大学动物室的CP-1的表达。结果:免疫后12d~17d,发病鼠出现EAE临床症状,HE染色,光镜下可见血管周炎性浸润,MCP-1的表达明显增加。结论:山西医科大学CP-1 多发性硬化(MultipleSclerosis,MS)是中枢神经系统(CentralNervousSystem,S)的炎性脱髓鞘疾病,多发于20岁~40岁女性,大多数患者的病程为复发和缓解交替,在复发期常出现视力
2、受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。MS病因和发病机制复杂,一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎(ExperimentalAu-toimmuneEncephalomyelitis,EAE)的病理变化及发病机制与急性MS极其相似,因此,成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1材料与方法 1.1试验材料 .bovisBCG即制得CFA。将CFA与GPSCH等体积混合,用注射器反复抽推,制成油包水乳液,制成完
3、全抗原,放置冰上备用。 1.2.2模型制备:将健康、雌性S的多种情况;发病后,症状减轻,食欲开始增加,体重恢复等。 2.2病理检测 在临床症状出现之前,EAE大鼠和佐剂组、正常大鼠一样,S中几乎找不到典型的血管周炎性细胞的浸润,也找不到其他病理上的改变。当出现临床症状时,S内有典型的血管周炎性细胞的浸润。随着病情的增加,炎症病灶的范围和细胞浸润的程度也相应增加,临床症状评分为3级的典型EAE动物仅在腰膨大处发现EAE典型的血管周袖套样炎性细胞浸润;3级以上者,可在视交叉区域及大脑的皮质、皮髓交界处甚至深部髓质,脑脊膜和侧脑室周
4、围都有大量的EAE典型的血管周袖套样炎性细胞浸润;临床表现不一样的动物,血管周袖套样炎性细胞浸润的部位、程度、范围、数量也不一样。在缓解期间,临床症状减轻、消失的动物,S内典型的病理变化也相应减轻或消失(图1)。 2.3原位杂交结果 正常大鼠和佐剂组的MCP-lmRNA阳性细胞数为4±2,EAE组为36±30,方差分析:F=15.81,P=0.0001<0.01,差异非常显著。q检验:EAE组MCP-1mRNA阳性细胞数与正常对照组、佐剂组分别比较均有统计学上的差异(P<0.01),正常大鼠与佐剂组之间没有统计学上的
5、差异(P>0.05)(图1)。 图1正常大鼠、EAE大鼠HE和ISH染色×400 略 3讨论 EAE是自身免疫性疾病MS的理想动物模型,EAE模型的诱导与多个因素有关系,比如:①动物的类型、品系、年龄,性别;②所用的抗原纯度、类型、计量、物理形态和注射方法;③佐剂的来源等。通过总结其他人的实验方法,本实验摸索出一个针对山西医科大学S的类似:髓鞘蛋白反应性CD4+Thl活性增高,导致Thl细胞因子(尤其IFN-7是一种关键性的因素)上调;疾病的免疫细胞要经过趋化、粘附、生物膜的降减等作用才能进入S,在EAE或MS中,与
6、这些活动有关的细胞因子MCP-1、ICAM-1MMPS等一般都上调;此外,NO可对神经元也起抑制性细胞毒作用。其中MCP-1是β类趋化因子家族的一个成员,Godiska等曾发现:MCP-1表达广泛分布在脊髓[2],在主动免疫的C57BL/6MCP-1-裸鼠会产生效应性T细胞,但没有出现EAE临床症状,将这些细胞转染给野生鼠配体,这些配体出现EAE特有的临床症状;同样野生型鼠的效应性T细胞主动转染MCP-1-裸鼠也不出现EAE大鼠临床症状,这是由于MCP-1-裸鼠缺乏MCP-1基因,无法介导效应性T细胞进入S[3]。本实验中发现:正
7、常大鼠和佐剂组MCP-1mRNA阳性细胞数少,而所有EAE组MCP-lmRNA阳性细胞数却都很高,MCP-1参与了EAE的病理过程,作为EAE疾病的关键性趋化因子,可作为实验指标。 参考
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