桑枝多糖的提取与含量测定

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1、桑枝多糖的提取与含量测定【摘要】目的建立一种测定桑枝中多糖含量的方法。方法采用水提醇沉法对桑枝中的多糖进行提取，用Sevag法等进行纯化，蒽酮-浓硫酸法测定多糖的含量。结果回归方程：A=0.02494C+0.0571，r=0.9995，线性范围为0.08～0.4μg·L-1。桑枝多糖的含量为18.74%（RSD=2.1%)，平均回收率为98.6%，RSD=1.4%。结论该法简便、快速、重现性好，为桑枝的质量控制提供了方法。【关键词】桑枝；多糖；蒽酮浓硫酸法　　Abstract：ObjectiveToestablish

2、akindofdeterminingmethodofcontentsofpolysaccharidesinMulberryTg/g,averagerecoveryethodissimple,specificandaccurate.ItprovidesamethodformasscontrolofMulberryTethod桑枝为桑科植物桑MorusalbaL.的嫩枝，MulberryTl）。桑枝，200405采于新疆喀什。　　2方法　　2.1桑枝多糖的提取称取干燥至恒重并过40目筛的桑枝粉末100g，加水适量，于95

3、℃时超声提取30min，过滤，滤渣于95℃超声再提取30min，相同条件下提取3次，合并提取液，于旋转蒸发仪上浓缩至100ml，在其中加95%乙醇至含醇量为85%，4℃时静置过夜。于40000r/min的条件下离心分离，离心后的沉淀物加少量热水溶解，再加95%乙醇至含醇量为85%，静置过夜，离心分离，得粗多糖。　　2.2多糖的精制植物粗多糖中一般含有蛋白质，以游离态和结合态存在，将蛋白酶法和Sevag法结合起来，不但可脱去游离蛋白，而且可脱去结合蛋白质。将上述得到的粗多糖溶于水，加入2%木瓜蛋白酶，60℃时酶解2h，再

4、用Sevag法（氯仿∶正丁醇=4∶1）除蛋白15次。加1%活性碳脱色，抽滤，加入95%乙醇使含醇量达85%，4℃时静置过夜，离心分离。沉淀物冷冻干燥，即得精制淡黄色的桑枝多糖。将多糖溶液进行200～400nm紫外区扫描，无特征吸收峰，茚三酮反应为阴性，说明桑枝多糖中的蛋白质已除干净。　　3结果与讨论　　3.1标准溶液的制备精密称取葡萄糖对照品0.1000g，用蒸馏水溶解并定容至100ml，配成浓度为1.000mg/ml的标准储备液。　　3.2标准曲线的绘制精密吸取上述葡萄糖标准储备液0.0，0.1，0.2，0.3，0.

5、4，0.5ml于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定溶至刻度。分别取2.0ml于25ml具塞试管中，加蒽酮-浓硫酸试剂4ml，放入沸水浴中加热8min，迅速冷却至室温。于620nm处测定吸光度值，计算回归方程：A=0.02494C+0.0571，r=0.9995，线性范围为0.08～0.4μg·L-1。　　3.3换算因子的测定精密称取精制后的桑枝多糖0.0100g，用少量热蒸馏水溶解后，定溶于100ml容量瓶中，摇匀。精密吸取此溶液2ml于25ml具塞试管中，加蒽酮-浓硫酸试剂4ml，沸水浴中加热8min，迅速冷却至室温，

6、于620nm处测定吸收度。根据标准曲线计算浓度，再按下式计算换算因子，得f=9.6189。f=g），C为多糖浓度（μg·L-1），D为稀释因子。　　3.4精密度实验精密吸取对照品溶液1.0ml，10份，于25ml具塞试管中，加蒽酮-浓硫酸4ml，沸水浴中加热8min，迅速冷却至室温。于620nm处测定吸光度值。结果吸光度的RSD=1.4%。　　3.5样品溶液的测定准确称取过40目筛的干燥桑枝粉末约0.5g（4份），置于100ml容量瓶中，加水适量，在95℃水温中超声提取30min，过滤于另一100ml容量瓶中，洗涤滤渣

7、多次，用水稀释至刻度。精密吸取样品溶液5.0ml，置100ml容量瓶中加水稀释至刻度。将稀释后的溶液精密吸取2.0ml置25ml具塞试管中，加入蒽酮－浓硫酸试剂4ml，沸水浴中加热8min，迅速冷却至室温，于620nm处测定吸光度值，代入回归方程求多糖浓度C。根据下式计算含量。含量=CDfin/次），合并滤液，于旋转蒸发仪上浓缩至450ml，将其分为9份，加入乙醇，使含醇量分别为30%，40%，50%，60%，70%，75%，80%，85%，90%，静置过夜，离心分离，沉淀用95%乙醇、丙酮、乙醚等洗涤多次，60℃真空

8、干燥。依法测定含量，求提取率，见图1。实验发现含醇量达85%时，多糖的含量较高，本实验选含醇85%为醇沉条件。　　4.3提取温度的选择固定提取时间为30min，分别在60，70，80，90，95，100℃超声提取1次。结果见图2。　　从图2可知，提取温度为95℃时，提取率较高，本实验选95℃为超声提取温度。　　4.4提取时间的选择