动脉硬化性脑梗死与人类mhc

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1、动脉硬化性脑梗死与人类MHC【摘要】目的探讨中国北方汉族人动脉硬化性脑梗死（atherothromboticcerebralinfarction，ABI）易感的分子机制和确立一种较为实用的人类主要组织相容性复合体（majorhistopatibilityplex，MHC）-DRB1*等位基因的检测方法。方法采用聚合酶链式反应和顺序特异性引物（polymerasechainreaction-sequencespecificprimer，PCR-SSP）基因分析方法，对36例ABI患者及32例无血缘关

2、系的健康人的MHC-DRB1*各等位基因进行了检测分析，并将该方法与其他3种检测MHC基因的方法进行对比。结果结果表明，MHC-DRB1*0301基因与ABI呈正相关（RR=5.46，P＜0.05），其他MHC-DRB1*各等位基因均无统计学差异。结论本项研究结果提示MHC-DRB1*0301基因可能是北方汉族人ABI的致病易感基因之一，为揭示ABI的发病机制中免疫遗传学机制所起的作用提供了重要信息和依据。尽管目前MHC-DR基因分型方法已有多种，但本文所采用的方法具有快速、简便、准确和可靠等优点

3、，值得推广应用。【关键词】MHC-DRB1*；脑梗死；易感基因MHC-DRB1*genepolymorphisminpatientsboticcerebralinfarction【Abstract】ObjectiveToobservethecorrelativitybetorphismandatherothromboticcerebralinfarction（ABI）.MethodsMHC-DRB1*genepolymorphismin36patientsalcontrolsubjectseras

4、echainreaction/sequencespecificprimer（PCR/SSP）technique.ResultsThefrequencyofMHC-DRB1*0301allelemunogeicsplayapredominantpathogeicsroleinasubsetofABIpatients.IndividualscarryingMHC-DRB1*0301allelesmaybesusceptibilitygenetoABI.Thismethodismorespecific，

5、sensitive，simple，rapidandaccurate，andcouldbeappliedtotheroutineclinicaldetection.【Keyboticcerebralinfarction，ABI）是一种多基因遗传性疾病，具有强烈的遗传易感性［1，2］。人类组织相容性复合体（majorhistopatibilityplex，MHC）是人类最高多态的遗传系统，与疾病的遗传直接相关，其在多基因遗传性疾病中起到重要作用。本文对我国北方汉族ABI患者及健康人，采用先进的聚合酶链

6、反应-序列特异性引物（polymerasechainreaction-sequencespecificprimer，PCR-SSP）技术，从DNA水平上探讨ABI的易感基因，为诊断、治疗及预防提供科学依据。1对象与方法1.1研究对象ABI组：按照1996年全国脑血管病学术会议修订的诊断标准［3］，并经CT或MRI证实。选择ABI患者36例，其中男21例，女15例，年龄43～65岁，平均（56.1±4.1）岁。除外糖尿病、原发性高血压患者。对照组：门诊体检健康者32例，其中男20例，女12例，年龄4

7、0～60岁，平均（52.1±4.1）岁。所有受检者均为无血缘关系的东北地区汉族人，并排除肝、肾、内分泌等影响脂代谢的疾病。1.2方法1.2.1基因引物的设计及化学合成根据已知的人类MHC-Ⅱ类（DR）基因密码顺序，可选择性地合成每一MHC-DRB1*等位基因或亚基因引物及反义引物一对（针对DRB1*第2外显子基因多态性设计SSP），分别特异性地扩增所需检测的DNA片断，每对SSP所扩增的产物具有等位基因的特异性，其只能与某一等位基因特异性片断碱基序列互补性结合。全部引物由美国PEL-FreEi生物

8、工程公司提供。1.2.2基因组DNA提取采集所有研究对象的外周血5ml，5％EDTA抗凝，应用Resse介绍的方法提取基因组DNA，被用于50μlPCR扩增反应体系。1.2.3PCR-SSP方法使用美国PE公司生产的PCR仪（9600型）及有关试剂，PCR扩增15μl内含5pmol特异性引物，内参照物0.5pmol，dNTP各50μmol/L，Taq酶0.5u，10×PCR缓冲液1.5μl。预变性94℃60s；变性94℃60s；退火58℃30s；延伸72℃45s；后延伸72℃300