双歧杆菌联合顺铂对黑色素瘤小鼠的治疗作用及机制论文

《双歧杆菌联合顺铂对黑色素瘤小鼠的治疗作用及机制论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、双歧杆菌联合顺铂对黑色素瘤小鼠的治疗作用及机制论文【摘要】目的：探讨双歧杆菌、顺铂及二者联合对黑色素瘤小鼠的抑瘤作用及其机制.方法：建立黑色素瘤荷瘤小鼠模型，分别以皮下及腹腔注射双歧杆菌和顺铂，处死小鼠后测瘤质量计算抑瘤率，病理切片后HE染色观察瘤组织及瘤细胞变化，流式细胞仪测瘤细胞周期，MTT法测小鼠淋巴细胞活性，CD3,CD4,CD8双荧光标记法测小鼠T细胞亚群变化.结果：注射1×1010cfu/L的双歧杆菌其抑瘤率可达54.0％，与顺铂组相似.freela公司；CD3FITC,CD4PE,CD8PE荧光双标记mAb购自BD公司；RPMI16

2、40培养基、胎牛血清为TBD公司产品;全自动酶标仪（ThermoTT法.无菌取脾，制备脾细胞悬液，台盼蓝染色观察活细胞数＞95％，调细胞数至6×109/L，加入96孔板,每孔100μL,各设6个复孔,放于37℃,50mL/LCO2培养箱中培养68h,加MTT液20μL,培养4h,离心1000r/min,10min弃上清，加DMSO液150μL,用微型振荡器振荡10min，使甲赞颗粒溶解,酶联免疫检测仪（570nm）测定各孔A值.1.2.4.5T细胞亚群的检测取4×109个/L的小鼠脾细胞悬液,PBS洗涤,待测管中加入0.5mL的细胞悬液,分别加入CD3

3、FITC,CD4PE,CD8PE抗体,振荡混匀,室温避光放置30min,PBS清洗,同上离心2次,计数1×104个细胞,上机检测细胞CD3,CD4,CD8阳性百分率,计算CD4+/CD8+比值.统计学处理:数据采用SPSS11.0软件进行方差分析及Dunntt检验.结果以x±s表示.2结果2.1双歧杆菌及顺铂对黑色素瘤生长的影响采用双歧杆菌及顺铂治疗后,黑色素瘤的生长受到抑制，细菌高、低剂量组瘤质量分别为(0.992±0.121)g和(1.012±0.105)g，顺铂组瘤质量为(0.877±0.091)g，与对照组（2.200±0.105）g比较差

4、异显著（P0.01）；但不同浓度双歧杆菌其瘤质量基本不变（P0.05），二者联合应用的抑制作用最强，瘤质量为(0.562±0.068)g，抑瘤率达74.45％.2.2黑色素瘤细胞的形态学变化HE染色结果显示：肿瘤对照组B16细胞核质比例大,核呈圆形或卵圆形,核仁数目多,核分裂多见,紧密排列且有交错层叠现象;经顺铂作用后肿瘤组织呈片状坏死，部分细胞核质比例缩小，但肿瘤细胞排列紊乱；经不同浓度的双歧杆菌作用后，肿瘤组织除片状坏死外，肿瘤细胞排列有序，核质比例缩小，二者联合作用后肿瘤组织坏死现象增加（图1）.A:顺铂;B:顺铂＋细菌;C:细菌高剂量;D:细菌低

5、剂量.图1顺铂和双歧杆菌作用后肿瘤组织的改变×4002.3双歧杆菌及顺铂对瘤细胞周期的影响与肿瘤对照组比较，应用不同浓度双歧杆菌后，瘤细胞主要阻滞于G1期，凋亡率无明显变化，应用顺铂后瘤细胞生长阻滞于S期，二者联合应用后，瘤细胞主要阻滞于S期，凋亡率明显上升.表1双歧杆菌、顺铂及二者联合对瘤细胞周期的影响bP0.01vs对照.2.4双歧杆菌及顺铂对荷瘤小鼠淋巴细胞增殖的影响小鼠接种B16细胞后，其淋巴细胞活性略有增加，与正常组比较无统计学差异，说明B16细胞抗原性较弱；应用顺铂后，小鼠淋巴细胞活性减弱，增殖处于抑制状态，与正常组比较差异有统计学意义（P0

6、.01）；应用不同剂量双歧杆菌后，小鼠淋巴细胞活性增强，与正常组比较差异有统计学意义（P0.01），但不同剂量之间差别无统计学意义；二者联合应用提高了小鼠淋巴细胞活性，与顺铂组比较差异有统计学意义（P0.01），与正常组比较，小鼠淋巴细胞活性减弱（P0.01）.图2双歧杆菌、顺铂及二者联合对荷瘤小鼠淋巴细胞的作用2.5双歧杆菌及顺铂对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响荷瘤小鼠T细胞亚群中不同细胞及其比例出现异常,与正常组比较，肿瘤对照组CD4+,CD8+及其CD4+/CD8+细胞比值均属正常，CD4+,CD8+比例稍增加（P0.05），说明接种B16细胞后，荷

7、瘤小鼠具有一定的免疫能力；经顺铂治疗后，表现为CD8+细胞比例下降（P0.01），说明其抗肿瘤免疫功能下降；而顺铂和双歧杆菌联合治疗后，CD4+比例稍下降，CD8+比例上升（与顺铂组比较P0.01），CD4+/CD8+比值正常，说明细胞免疫功能有所恢复；经不同剂量细菌作用后，CD4+比例较正常组增加（P0.01），说明其细胞免疫功能增强（表2）.表2双歧杆菌、顺铂及二者联合对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的作用3讨论恶性黑色素瘤的自行消退说明与机体的免疫功能有关.近几年试用疫苗、干扰素、白细胞介素2和抗原肽激活的树突细胞等生物反应调节剂虽取得一定效果，但有些疗

8、效不十分理想或有一定毒副作用［4-7］.顺铂是常用的抗肿瘤制剂，其抑瘤杀瘤作用随