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1、推拿干预对便秘模型大鼠c作者：赵文树，陆金根，曹永清【摘要】 目的探讨大鼠后肢活动和便秘的关联性及推拿干预对远端结肠c-kit表达的影响,以研究推拿治疗便秘的作用机制。方法剪除大鼠后肢股骨，建立便秘模型，经推拿治疗后，分别提取各组大鼠结肠远端细胞总蛋白,采用免疫蛋白印迹(30电动按摩进行电动按摩，取足三里、天枢、中脘、关元穴，2次/d，每穴3min，持续治疗8周；乳果糖组采用乳果糖稀释液灌胃作疗效对照。 2.3E(β-Mercaptoethenal)，一起煮沸。在4℃下，12000r/min，离心5m
2、in。 蛋白上样，经由12%SDS-PAGE分离胶分离，浓缩胶50v,40min;分离胶100v电泳到溴酚蓝至底边1/3处。 2.3.2转膜PVDF膜用甲醇浸湿，去离子水冲洗，再转移到Transferringbuffer中平衡20min；电泳胶置Transferringbuffer中平衡20min；裁6张与胶同样大小的M滤纸，置Transferringbuffer中平衡；按下列顺序装好blot：负极—3层滤纸—电泳胶—PVDF膜—3层滤纸—正极。300mA转膜120min。转印至PVDF膜上。 2.
3、3.3封闭将此膜取下，剪角后在5%脱脂奶粉封闭液中缓慢摇动2～4h。 2.3.4一抗孵育将一抗按1∶500稀释，与膜一起孵育4℃过夜。 2.3.5二抗孵育用1×PBST洗涤3～4次，10min/次。将此膜与Hrp标记的二抗（1∶3000）一起孵育2h,室温。 2.3.6检测用1×PBST洗涤3～4次，10min/次。将检测试剂ECL的A液与B液以1∶1的比例混合，检测试剂的用量为0.1ml/cm2。室温下，与ECL反应50sec。吸干多余的检测试剂；膜用保鲜膜封起，暗室曝光，时间：30s。用美国BI
4、O-RAD公司QuantityOne分析软件对显影条带进行灰度分析，将目的蛋白与GAPDH灰度值的比值作为目的蛋白的相对表达水平。 2.4统计学处理实时定量数据采用SPSS11.0统计软件进行单因素方差分析和t检验，数据以均数±标准差（±s）表示，以P值表示统计学差异，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异非常显著。 3结果 复制卧床便秘大鼠模型两个月后，开始推拿干预，持续治疗两个月，利用ikkelsenH,etal.Structuralaspectsofinterstitialcellso
5、fCajalasintestinalpacemakercells［M］.BoceRatonFL:CRC,1995,193. ［2］HuizingaJ,LiuL,BlennerhassettM,etal.Intracellularmunicationinsmoothmuscle［J］.Exoerientia,1992,48:932. ［3］utationoftheproto-Oncogenec-kitblocksdevelopmentofinterstitialcellsandelectricalrhy
6、thmicityinmurineintestine［J］.JPhysiol(Lond),1994,480:91. ［4］PiotroyoelectricactivityandsubstancePinthedorsalvagalplexofrats［J］.NeurosciLett,2004,356(2):99. ［6］OuyangH,YinJ,,NakadeY,etal.ElectmacupunctureatST-36accelerarescolonicmotilityandtransitinfreel
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