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时间:2018-11-19
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1、羊水基质金属蛋白酶与胎膜破裂的关系论文分娩时胎膜自然破裂的机理尚不完全清楚,目前认为,胎膜中胶原的降解是其发生的重要基础。胶原的降解依赖基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)的作用[1]。为探讨MMP与胎膜正常破裂及胎膜早破(prematureruptureofmembrane,PROM)发生的关系,我们检测了胎膜正常破裂及PROM孕妇羊水中总MMP的活性及其成分,现报道如下。一、资料与方法1.资料收集本院足月剖宫产分娩的孕妇60例,胎膜正常破裂者30例为对照组,PROM者30例为PROM组.freell,立即离心、过滤,-70℃
2、保存。(2)酶活性的测定:羊水消化生物素标记明胶,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定剩余明胶的含量,换算出酶的活性(以37℃下每1ml羊水12h消化的明胶量表示,单位:ng/ml*12h),用加乙二胺四乙酸(终浓度80mmol/L)的羊水作阴性对照。(3)羊水中MMP成分的酶谱分析:参照Moll等[2]介绍的方法进行明胶电泳,电泳完毕将凝胶置于培养皿中,经2.5%Triton-X100洗涤后,37℃下孵育18h,用考马斯亮蓝G-250染色1h,最后脱色48h;酶经电泳组分后,将该处的明胶消化,染色后形成不着色的透明带。3.统计学处理:实验结果作t检验。二、结果1.
3、对照组羊水总MMP的活性变化:未临产时为(49±15)ng/ml*12h,潜伏期为(58±15)ng/ml*12h,活跃期为(102±29)ng/ml*12h。潜伏期高于未临产期,但差异无显著性,活跃期较潜伏期显著升高,差异有极显著性(P<0.01)。2.PROM组羊水中总MMP的活性变化:PROM组未临产时羊水中总MMP活性为(85±10)ng/ml*12h,潜伏期为(91±7)ng/ml*12h,活跃期为(104±23)ng/ml*12h。潜伏期高于未临产期,但差异无显著性,活跃期较未临产期显著升高,差异有极显著性(P<0.01)。在未临产期和潜伏期,PROM
4、组羊水中总MMP的活性均显著高于对照组,差异有极显著性(P<0.01)。3.羊水中MMP的酶谱变化:羊水中较明确的MMP带有4条,相对分子质量分别为92000、83000、72000和66000。对照组未临产期羊水中以92000和72000的MMP条带为主,活跃期则4条条带都有,其中相对分子质量为92000和83000的MMP条带所消化的明胶带,较未临产期明显增宽。PROM组羊水中MMP的成分与对照组基本相同,但在未临产时羊水中各MMP消化的明胶带较对照组宽。三、讨论1.MMP的特性:MMP是一类结构中含有锌和钙等金属离子的蛋白水解酶,能水解胶原、弹性蛋白、氨基葡
5、聚糖等多种细胞外基质,目前已发现的有十几种,其结构相似,均以酶原的形式从细胞中分泌,活性都能被组织金属蛋白酶抑制因子和乙二胺四乙酸抑制。近年来的研究发现,MMP可能在胎膜破裂、分娩及产后子宫复旧等过程中发挥重要的生理功能。2.羊水中MMP的成分:Vadillo-Ortega等[3]在正常分娩产妇的羊水中,检测出了3条MMP条带,相对分子质量分别为183000、92000和83000,分别是MMP-9的二聚体、酶原和活化形式。但我们发现,羊水中存在4种MMP成分,相对分子质量分别为92000、83000、72000和66000,未能发现183000nbsp;的MMP
6、-9二聚体,推测可能是人种的差异,也有可能是方法的差异。根据相对分子质量推测,92000和66000的MMP可能分别是MMP-9的酶原和活化形式,而72000和66000为MMP-2的酶原和活化形式。因此,羊水中MMP的主要成分为MMP-9,包括其酶原和活化形式,究竟是否存在MMP-9二聚体和MMP-2有待进一步的研究证实。3.羊水中MMP活性变化与胎膜破裂的关系:胎膜完整性的保持依赖宫腔内压与胎膜强度的平衡。正常分娩活跃期宫内压增加和胎膜强度下降导致胎膜破裂。胶原的合成不足和降解增加,引起胎膜强度下降。胎膜中胶原的大量降解可能与MMP活性升高有关。Maj等[4]
7、发现,分娩发动后胎膜组织中MMP的活性显著升高,并以MMP-9活性升高更明显;我们的研究结果表明,对照组羊水中总MMP的活性在产程的活跃期显著升高,从明胶酶谱来看,以MMP-9的升高更明显。因此活跃期羊水中总MMP,特别是MMP-9活性的增高,引起胎膜中胶原的大量降解,可能是胎膜破裂发生的重要生理基础。4.羊水中MMP活性异常与PROM的关系:PROM患者的胎膜中胶原的含量低于正常同孕周妇女,这与其胎膜中胶原合成减少和分解异常增加有关。我们发现PROM组羊水中总MMP活性异常升高。另有研究表明,PROM患者羊水中基质金属蛋白酶抑制因子的含量则显著低于正常孕妇[5]
8、。因此,羊
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