survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系

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1、Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系【关键词】蛋白　　ExpressionofsurvivinprotEinsinrecoveryofmicespermatogenesisanditscorrelationcellapoptosisHUChuanYi　　【Abstract】AIM:ToexploretheexpressionofantiapoptoticprotEInssurvivininthetestistissueanditscorrelationcellsapoptosis.METHOD

2、S:AdultKunmingmiceg/kgbodyodelsintheprocessofspermatogenesisrecovery.TestesmunohistochemistrySPmethodandthegermcellapoptosisissionelectronmicroscopeandterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL)technique.RESULTS:Survivinostlyexpressedinthel

3、eydigcells,secondaryspermatocytesandspermatoblasts.Thegermcellapoptosismainlyoccurredinprimaryspermatocytesandroundspermatoblasts.Survivinexpressioncellapoptosis(r=-0.784,P<0.01).CONCLUSION:Survivininducedinhibitionofapoptosismayparticipateinthebalanceofapoptosis

4、andthusplaysanimportantroleinthenormalspermatogenesis.　　【Keycells　　【摘要】目的:探讨新的凋亡相关基因survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系.方法:间隔24d两次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型，第2次给药后随机分为1，2，3，4，6，8，10cells,Gc）的增殖和自发性凋亡等过程，在正常的精子发生过程中，Gc的增殖和凋亡保持一定的平衡状态.Survivin是近年来分离出的凋亡抑制基因家族中的新成员，在调控细胞周期

5、和抑制细胞凋亡中可能起重要作用.我们通过对survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达变化规律及其与Gc凋亡的关系，试图阐明survivin对小鼠Gc凋亡的调控作用，以期能为男性生育的临床研究提供理论及动物实验的依据.　　1材料和方法　　1.1动物模型的建立和分组昆明雄性2~3mo龄小白鼠56只（由湖北省医学科学研究院实验动物中心提供），体质量35~55g，按标准饲养方法喂养.间隔24d两次腹腔注射白消安（德国Sigma公司产品），每次剂量为10mg/kg，建立小鼠精子再生的动物模型.模型建立后随机分为7组，分别为第2次用药

6、后第1,2,3,4,6,8,10厚连续切片，分别行survivin蛋白免疫组化和细胞凋亡检测.　　1.2方法　　1.2.1电镜样品的制备新鲜睾丸组织1mm×1mm×1mm,置于25mL/L的戊二醛预固定24h，PBS清洗后转至10g/L的锇酸中固定2h，逐级丙酮脱水，Epon812包埋，超薄切片机切片，日立H600电镜观察.　　1.2.2免疫组化采用超高敏SP法.一抗为兔抗人survivinpAb(1∶100)，二抗为羊抗兔IgG(1∶120)，以上抗体及SP试剂盒均购自福州迈新公司.具体操作按说明书进行，以该公司提供的阳性片

7、作为阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照.　　1.2.3检测细胞凋亡采用DNA原位末端标记(TUNEL法).TUNEL试剂盒为德国宝灵曼公司产品，检测程序参照试剂盒说明书，方法简略为：常规脱蜡入水，20mg/L蛋白酶K37℃消化15min，30mL/LH2O2阻断内源性过氧化物酶10min，1∶10小牛血清封闭非特异性反应，滴加末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)反应液，室温孵育60min，DAB显色.以乳腺癌标本作为阳性对照，以PBS液代替TdT反应液作为阴性对照.　　1.2．4Survivin染色图像分析及数据处理组织切片中

8、胞质染为黄至棕黄色者为阳性细胞标志.每张切片随机选取5个视野，每个视野随机选取20个阳性细胞胞体，输入图像分析仪（TJY400真彩色细胞图像分析仪），对所选阳性细胞的灰度值进行测量，求出每组阳性细胞胞体的平均灰度值.　　1.2．5凋亡细胞计数细胞核上有黄至棕色颗粒着色为阳性标