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1、高效液相色谱法测定蛹虫草子实体中腺苷的含量论文【摘要】目的建立测定蛹虫草子实体中腺苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相:水甲醇（体积比85∶15），流速:1.2mL/min；检测波长:260nm。结果腺苷平均加样回收率为100.23％，RSD=1.43%。结论该方法简便、准确，适用于该产品质量检验分析。【关键词】高效液相色谱法；蛹虫草子实体；腺苷Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfor
2、contentdeterminationofadenosininCordycepsmilitaris(L.)Link.MethodsSamplesonslTMC18column(4.6mm×250mm,5μm)byusingethanol(85∶15)asmobilephase.Thedetection.ResultsTheaveragerecoveryofadenosineethodissimple,accurate,ilitaris(L.)Link.Keyilitaris(L.)Link;adenosi
3、ne蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草)子实体为麦角菌科虫草属真菌蛹草菌Cordyceps.militaris(L.)Link.的干燥子座,是虫草属的模式种，也是与冬虫夏草极为相似的种。研究资料表明，蛹虫草子实体的活性成分与野生冬虫夏草类似，含有多量的虫草素、腺苷、腺嘌呤、虫草酸、虫草多糖等［1-3］。有文献报道.freelonsilTMC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：水甲醇（体积比85∶15）为流动相。流速1.2mL/min；检测波长：260nm；进样量：20μL；柱温：室温25℃。2.2
4、对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的腺苷对照品10mg，置50mL容量瓶中，加体积分数为90%的甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL中含0.2mg对照品的溶液，摇匀，即得。2.3供试品溶液的制备称取蛹虫草子实体样品适量，粉碎，过2号筛，备用。精密称取10g供试品粉末，置500mL圆底烧瓶内，加入体积分数为50%的乙醇水溶液100mL，置沸水浴中回流提取1h，取出过滤，共提取3次，滤液合并后蒸干，加体积分数为50％的甲醇溶解定容至100mL容量瓶，摇匀，经0.45μm微孔滤膜压滤，得供试品溶液。2.4最大吸收波
5、长的选择取腺苷对照品和供试品溶液适量，加体积分数为90%的甲醇溶解，用紫外—可见分光光度计于200～400nm波长范围扫描。腺苷对照品和供试品溶液均在260nm处有最大吸收。结果同《中国药典》中“冬虫夏草”腺苷的最大吸收波长一致。因此确定测定波长为260nm。2.5线性关系的考察精密吸取0.4，0.5，0.6，0.8，1.0mL的腺苷对照品溶液（每1mL中含0.2mg对照品），分别置10mL的容量瓶中，用体积分数为90％的甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪(进样量20μ
6、L)。以质量浓度为横坐标(ρ,mg/mL),峰面积(A)为纵坐标,.freelL的对照品溶液，每次进样20μL，连续进样5次，测定峰面积，腺苷峰面积RSD为0.41%（n=5）。2.7稳定性试验精密吸取供试品溶液20μL，分别于放置0、2、4、6、8h进样测定，结果供试品溶液在8h内峰面积无明显变化，峰面积RSD为0.66%。2.8加样回收率试验采用加样回收法,取已知含量的同一批供试品粉末约10g,共5份，分别精密称定，置圆底烧瓶中，再分别精密加入“2.2”项下腺苷的对照品溶液1mL，再加入体积分数为50%
7、的乙醇100mL,按“2.3”项下方法制备溶液,进样测定，计算回收率，结果见表1。表1腺苷加样回收率试验（略）Tab.1Resultsofrecoverytest2.9样品的测定取5个不同批次的样品各10g,分别按“2.3”项下方法制成供试品溶液，进样20μL，测定峰面积，每个样品测5次，结果5个批号样品的腺苷含量分别为1.86、1.962、1.918、2.067、2.018mg/100mL。腺苷对照品与样品色谱图见图1、图2。图1腺苷对照品色谱图（略）Fig.1HPLCspectrumofadenosin
8、e图2样品色谱图（略）Fig.2HPLCspectrumofthesample3讨论3.1流动相的选择曾采用《中国药典》2005年版一部“冬虫夏草”项下磷酸盐缓冲液(pH6.50)甲醇(体积比17∶3)为流动相进行洗脱，结果发现腺苷色谱峰展宽严重，且主峰附近存在干扰峰。经反复实验摸索,调节流动相水甲醇体积比为85∶15时,采用本文的检测方法产生的色谱峰峰形尖锐，供试品中其他杂质峰对两个主峰测定无干扰。经方法学
