细菌内毒素标准品标定

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1、1.试剂和样品鲎试剂（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1112202，灵敏度：0.125EU/ml，规格：0.1ml/支）细菌内毒素检查用水（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1106130，规格：5ml/支）细菌内毒素工作标准品（P=160EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所批号：150601-201174）细菌内毒素国家标准品（10000EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所批号：150600-200707）2.操作步骤2.1细菌内毒素国家标准品稀释、细毒内毒素工作标准品稀释将细菌内毒素国家标准品用1m

2、l细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合仪上混合15分钟，然后制备成4个浓度的标准内毒素溶液，即0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.0625EU/ml和0.03EU/ml备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。具体稀释步骤如下：100001010.250.1250.06250.03待复核的细菌内毒素工作标准品标示效价为160EU，用1ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合仪上混合15分钟，然后制备成4个浓度的内毒素溶液，即640倍（0.25EU/ml）、1280倍（0.125EU/ml）、2560倍（0.0625EU/

3、ml）和5120倍（0.03EU/ml）备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。具体稀释步骤如下：16016810.250.1250.06250.03以上细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品需同时进行。2.2加样取规格为0.1ml/支的鲎试剂36支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，70%异丙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡将准备好的鲎试剂取其中18（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管），4支（

4、管）4列每列每支分别加入0.1ml的2λ、λ、0.5λ和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。加样具体操作如下表：国家标准品浓度（EU/ml）0.250.1250.06250.03细菌内毒素检查用水平行管1（ml）0.10.10.10.10.1平行管2（ml）0.10.10.10.1平行管3（ml）0.10.10.10.10.1平行管4（ml）0.10.10.10.1将准备好的另外18（管）鲎试剂放在另一个试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管），4支（管）4列每列每支分别加入0.1ml的6

5、40倍、1280倍、2560倍、5120倍的内毒素溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。加样具体操作如下：工作标准品稀释倍数640128025605120细菌内毒素检查用水平行管1（ml）0.10.10.10.10.1平行管2（ml）0.10.10.10.1平行管3（ml）0.10.10.10.10.1平行管4（ml）0.10.10.10.1加样结束后，将鲎试剂管轻轻振动摇匀，避免产生气泡，放入试管恒温仪中，37℃±1℃保温60±2分钟。2.3结果记录将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管内形成

6、凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁脱者为阴性，记录为（－）。保温或拿取试管过程应避免受到震动造成假阴性结果。国家标准品浓度（EU/ml）0.250.1250.06250.03NCλc平行管1平行管2平行管3平行管4工作标准品稀释倍数640128025605120NCPt平行管1平行管2平行管3平行管4）效价计算：待标工作标准品的标定效价Pt按下式进行计算：Pt=1g－1(∑X/4)×1g－1(∑D/4)式中X为细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的对数值1gD为细菌内毒素工作

7、标准品反应终点浓度对应的稀释倍数的对数值1g