眼睑基底细胞癌组织中survivin的表达及统计

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1、眼睑基底细胞癌组织中Survivin的表达及统计【摘要】目的：探讨眼睑基底细胞癌组织中Survivin的表达。方法:收集武汉市中心医院和武汉大学中南医院病理科2002～2009年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌(basalcellcarcinoma,BCC)标本共20例，另取癌周围正常组织5例作对照。将眼睑基底细胞癌和正常组做免疫组织化学染色，观察各组细胞内Survivin的表达。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对Survivin在各组中的表达进行定量分析。结果：眼睑基底细胞癌组织中Survivin呈高表达，癌旁组织中Survivin呈低表

2、达。图像分析结果显示眼睑基底细胞组织与癌旁组织之间Survivin的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性(P<0.01)。结论：Survivin在眼睑基底细胞癌中的异常表达，对眼睑基底细胞癌的发生发展起了重要作用。【关键词】眼睑;基底细胞癌;Survivin;统计分析　眼睑基底细胞癌(basalcellcarcinoma,BCC)是最常见的眼睑恶性肿瘤，约占眼睑恶性上皮性肿瘤的85%～95%[1]。研究显示多种癌基因的异常表达在眼睑BCC的发生发展过程中有重要作用，研究癌相关基因抗原在BCC发生、发展及转移机制中的作用，对于揭示BCC的生物学行为及探索有效

3、的防治方法有重要意义。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1标本收集武汉市中心医院和武汉大学中南医院病理科2002～2009年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌(basalcellcarcinoma,BCC)标本共20例，另取癌周围正常组织5例作对照。所有标本均经10%甲醛固定,常规HE染色，光镜观察，病理检查确诊。　　1.1.2主要试剂即用型鼠抗人Survivin单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新生物有限公司);DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。　　1.1.3主要仪器YPBS(pH

4、7.4)漂洗3×3min;②抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;③滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;④正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;⑥滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(Pp7.4)漂洗3×3min;⑦滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.0

5、1MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;⑧滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;⑨苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照。　　1.3免疫组织化学结果判断　　Survivin抗原以细胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，细胞浆或胞核内无棕黄色反应物。　　采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对细胞浆或胞核的表达进行定量分析，每张切片随机选取

6、5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。　　1.4统计学处理　　数据以均数±标准差表示，用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。　　2结果　　2.1HE染色　　瘤体由基底样细胞组成，细胞核大，呈圆形或椭圆形，胞浆为嗜碱性，可见少量核分裂相。瘤体周边细

7、胞呈栅栏状排列。肿瘤周围结缔组织增生，有较多纤维母细胞，产生胶原纤维包绕在瘤体周围。　　2.2Survivin的表达　　基底细胞癌组织中可见癌细胞胞浆内棕黄色颗粒较多，Survivin表达呈阳性;癌旁组织的细胞胞浆内可见极少量的棕黄色颗粒，Survivin表达呈阴性。图像分析结果显示：眼睑基底细胞癌Survivin表达的平均光密度为0.3853±0.0254，癌旁组织Survivin表达的平均光密度为0.0246±0.0029;眼睑基底细胞癌Survivin表达的阳性面积率为0.3520±0.0263;癌旁组织中Survivin表达的阳性面积率为0.0305±0

8、.0021。经单因素方差