外周血多形核白细胞凋亡情况及生存率与急性胰腺炎严

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1、外周血多形核白细胞凋亡情况及生存率与急性胰腺炎严【摘要】　　目的研究急性胰腺炎大鼠模型外周血多形核白细胞即中性粒细胞（PMN）的凋亡情况及生存率与急性胰腺炎严重程度的关系。方法采用在大鼠胰胆管共同通道内逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠，制备不同严重程度的急性胰腺炎模型。18只SD大鼠随机分为对照组、模型1组（0.75%脱氧胆酸钠剂量组）、模型2组（1.5%脱氧胆酸钠剂量组）。分别于造模后6h处死各组存活大鼠。观察各组大鼠的胰腺组织病理学变化、组织病理学评分，血清、腹水淀粉酶水平，腹水量及外周血清IL6、IL8水平。同时用TUNEL法分析外周血多形核白细胞凋亡情况，用流式细胞分析法分析外

2、周血多形核白细胞存活率。并与急性胰腺炎严重程度各项指标进行统计学相关分析。结果模型1组大鼠较模型2组大鼠胰腺组织坏死及出血程度轻，组织病理学评分低，腹水及血清淀粉酶水平低，腹水量相对少,外周血清IL6，IL8水平低；病变程度较轻的模型1组大鼠外周血多形核白细胞凋亡指数比病变重的模型2组大鼠高（30±6vs20±4P<0.05）；病变程度较轻的模型1组大鼠外周血多形核白细胞存活率比病变重的模型2组大鼠低[（56.12±4.21）％vs（67.15±5.11）％，P<0.05]。结论急性胰腺炎时，外周血多形核白细胞凋亡指数与急性胰腺炎严重程度呈负相关，外周血多形核白细胞存活

3、率与急性胰腺炎严重程度呈正相关。【关键词】多形核白细胞；凋亡；存活率；急性胰腺炎　　Abstract：ObjectiveTostudytherelationshipbetodelsofSDratsdeoxycholateintothemonbilepancreaticductoftherats.Therats(n=18)intocontrolgroup,AP1group(0.75%dosegroup)andAP2group(1.5%dosegroup).Theapoptosisindexesofpolymorphonuclearneutrophils(PMNs)inacutepanc

4、reatitisisethod,andthesurvivalratesofPMNseasuredbyfloetryanalysis.ResultsTheapoptosisindexorphonuclearneutrophil;apoptosisindex;survivalrate;acutepancreatitis多形核白细胞即中性粒细胞（polymorphonuclearneutrophil，PMN）作为炎症反应的重要标志物之一，在炎症反应的各个阶段发挥着重要作用[1]。据以往研究[2]表明在急性胰腺炎病程中PMN的凋亡是一种保护现象，可延缓急性胰腺炎的病变发展。当PMN进入抗感染状

5、态时，其寿命比正常循环中的PMN半衰期明显延长，其存活及凋亡情况对炎症发展起着重要作用。外周血PMN的凋亡指数及生存率客观反应出外周血PMN的存在方式及组成成分，且可能与急性胰腺炎严重程度存在相关性。我们采用不同药物浓度制备不同严重程度的急性胰腺炎大鼠模型，观察各组大鼠的胰腺组织病理学变化、组织病理学评分，血清、腹水淀粉酶水平，腹水量及外周血清IL6、IL8水平等指标以确定急性胰腺炎病变严重程度，同时应用TUNEL方法分析外周血PMN的凋亡指数及应用流式细胞分析法分析外周血PMN的存活率。最终分析外周血PMN凋亡及存活率与急性胰腺炎大鼠模型严重程度的相关性。　　1材料和方法　　1．

6、1主要试剂及仪器　　（1）淋巴细胞分离液：上海恒信化学试剂有限公司产品；（2）原位细胞凋亡检测试剂盒（POD）：德国ROCHE公司产品；（3）DAB：北京中杉金桥生物技术有限公司；（4）EPICSXL流式细胞仪：美国贝克曼库尔特公司；（5）SD大鼠：中国医科大学动物试验室；（6）IL6、IL8ELISAKit：美国GenzymeCo；（7）AnnexinVFITCKit：深圳晶美生物工程有限公司。　　1．2实验动物及方法　　1．2．1选用健康SD大鼠18只，雌雄各9只，体重230～250g，随机分为对照组，模型1组，模型2组。其中，对照组仅常规开腹，翻动胰腺；模型1组、模型2组

7、分别为胰胆管内注射浓度为0.75%、1.5%的脱氧胆酸钠制备的急性胰腺炎模型组。给药后6h经静脉放血处死各组存活大鼠。　　1．2．2各组留取外周血5ml，肝素抗凝，注入已经预置5ml浓度为30g/L葡萄糖T500离心管中，混合均匀；将离心管于恒温箱中37℃静置45min，使RBC沉降；取上层液，以1000r/min、离心半径10cm离心10min，去上清；将沉淀重悬于含3％小牛血清的PBS中，铺放在等体积的淋巴细胞分离液上，以1000r/min