杜仲提取物的致突变实验研究

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1、杜仲提取物的致突变实验研究摘要】目的研究杜仲提取物的致突变性,为其应用提供理论依据。方法对实验小鼠灌服不同剂量的杜仲提取物水溶液,检测小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验(Ames实验)进行观察。结果杜仲提取物水溶液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率无影响;对小鼠精子无畸形诱变作用;对供试菌株无致突变作用。结论杜仲提取物对受试物未见有明显的致突变作用。【关键词】杜仲微核致突变实验杜仲EumiaulmoidesOliv在我国的应用历史悠久,近几年我国学者在杜仲的生物学、化学成分、生理生化等方面做了许多研究,董娟娥等〔1〕报道了杜仲籽油具有降压、降血脂及抗肿瘤等作用。唐建军等〔

2、2〕报道:杜仲含有丰富的维生素E和β-胡萝卜素,有延缓衰老、增强机体免疫力作用。为更好地开发利用杜仲,我们在探索张家界产杜仲提取物(简称杜仲提取物)的亚慢性毒理学作用〔3〕的基础上,对其致突变作用进行了研究,旨在为其应用提供一定的理论依据。  1材料  1.1药品与动物杜仲提取物主要成分绿原酸,张家界恒兴生物科技公司提供。昆明种小鼠购于湖南中医学院实验动物中心,批号:990218。注射用环磷酰胺:上海华联制药有限公司,批号:030504。叠氮钠(NaN3):上海试剂一厂,批号:990706。鼠伤寒沙门氏菌株(TA97,TA98,TA100,TA102)购于中国农科院兽医药品监察所。  1.

3、2主要仪器ES-C300A电子天平:湘仪天平仪器厂。组织匀浆器:北京玻璃仪器厂。  2方法与结果  2.1小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验小鼠60只,体重(28±2)g,雌雄各半,随机分为6组。杜仲提取物稀释液设为1.28,0.64,0.32,0.16g/kg4个剂量组,阴性对照为蒸馏水,两次灌胃给予受试物。阳性对照为环磷酰胺(CP)40mg/kg体重,两次腹腔注射间隔24h,第2次给受试物后6h,颈椎脱臼处死动物。按国家标准〔4〕取骨髓制片,每只动物计数1000个嗜多染红细胞,微核率以百分率表示。结果见表1。  表1杜仲提取物对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率实验(略)  与阴性对照组比

4、较,**P<0.01,△P>0.05;n=10  由表1可知,实验组雌、雄小鼠微核发生率为0.39%~0.43%,阴性对照组为0.43%,阳性对照组为4.38%,实验组与阴性对照组比较,微核发生率均无差异显著性(P>0.05),阳性对照组与阴性对照组比较,差异性显著(P0.01)。  2.2杜仲提取物对小鼠精子畸形的试验雄性小鼠60只,体重(30~35)g,随机分为6组,实验组剂量为1.28,0.64,0.32,0.16g/kg体重与阴性对照组(生理盐水),经口腔给予。阳性对照组用环磷酰胺40mg/kg体重腹腔注射。各组1次/d,连续5d给予受试物。于首次给药后第35天,颈椎脱臼处死

5、小鼠,按纪云晶〔5〕方法制片。每组计数2000个精子,计算其畸形率。结果见表2。  表2杜仲提取物对小鼠精子畸形的影响(略)  与阴性对照组比较,**P<0.01,△P>0.05;n=10  由表2可知,实验组小鼠的精子畸形率为7.6%~8.3%,阴性对照组为7.8%,阳性对照组为71.8%,实验组与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05),阳性对照组与阴性对照组比较差异极显著(P0.01)。  2.3Ames试验按Ames标准方法〔6〕对鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97,TA98,TA100,TA102进行增菌培养后进行鉴定,所采用的4个菌株特性均与Ames试验标准相符。在加与不加

6、活化物的条件下进行平板掺入法试验。杜仲提取物用双蒸馏水稀释为500,400,300,200μg/皿4个剂量组,阳性对照为叠氮钠(NaN3)10μg/皿,阴性对照为双蒸馏水100μg/皿,每个剂量组重复做2个平皿,结果见表3。  表3杜仲提取物对TA平均回变菌落数的影响(略)  +S9:加S9活化物,-S9:不加S9活化物  表3可知,不同剂量的杜仲提取物,无论加或不加S9活化系统,其回变菌落数与阴性对照组(双蒸馏水)比较,均无高于自发回变菌落数的2倍,而阳性对照组菌落数均高于阴性对照组的2倍以上。  3讨论  不同剂量杜仲提取物对小鼠PCE的试验表明,杜仲提取物稀释液对小鼠骨髓嗜多染红细胞

7、微核率未见明显影响(P0.01)。说明本品对细胞染色体无诱变作用。对小鼠精子畸形的影响试验,结果表明,杜仲提取物稀释液对小鼠精子畸形发生率未见明显影响(P0.01),说明本品对小鼠精子无畸形诱变作用,戚向阳等〔7〕用杜仲粉对小鼠精子进行的药理作用研究结果表明,杜仲粉对小鼠精子不产生畸变作用,其结果与本研究结果一致。  采用鼠伤寒沙门氏突变型菌株TA97,TA98,TA100,TA102进行回复突变试验,结果表明,不同剂量

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