胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗mrs活性的研究

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时间:2018-11-05

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1、胆木叶和茎挥发性成分对比分析及其抗MRS活性的研究:苏奎,龚敏,邓世明,周静【摘要】  目的对比分析胆木叶和茎中的挥发性成分和抗菌活性。方法采用水蒸气蒸馏法提取胆木叶和茎中的挥发性成分,用GC-MS技术进行成分对比分析,用滤纸片琼脂扩散法检测挥发性成分的抗菌活性。结果鉴定了胆木叶中的14个化学成分和茎中的10个化学成分;挥发性成分具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS)、大肠杆菌、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌的活性。结论胆木叶和茎中的挥发性成分主要分别为烷酸46.30%和烯酸48.94%;在抗菌活性中,抗MRS的活性最强。【关键词】

2、胆木 挥发性成分 抑菌 气相色谱-质谱联用分析 金黄色葡萄球菌  Abstract:ObjectiveTopareandanalyzethevolatileponentsanditsanti-bacterialactivityofNaucleaofficinalis'leavesandstems.MethodsThevolatileponentsdistillationfromleavesandstemsofNaucleaofficinalis,thenthevolatileponentsethod.ResultsTheresultsshosainv

3、olatileponentsfromleavesofNaucleaofficinalisis46.30%ofalkaneacidandstemsis48.94%ofolefineacid.Anti-MRSisthestrongestinanti-bacterialactivity.  Key×0.25mmi.d×0.25μm弹性毛细管柱;柱温采用程序升温:从60℃开始,以4℃/min升到120℃,再以6℃/min升温到250℃,保持5min;气化室温度250℃;柱前压为63kPa;载气为高纯氦气(99.999%),流量为1.0ml/min;进样量为0

4、.4μl;分流比为50∶1。  2.1.2质谱条件离子源为电子轰击源(EI);离子源温度230℃;四极杆温度150℃;电子能量70eV;电子倍增器电压1382V;接口温度270℃;溶剂延迟时间3min;扫描范围40~550u。  2.2胆木叶和茎挥发性成分制备各称取100g自然干燥粉碎的胆木叶和茎分别置于1000ml长颈圆底烧瓶中,加适量水浸泡,采用水蒸气蒸馏法将挥发性成分蒸馏出来,再用乙醚萃取,乙醚萃取液用无水硫酸钠脱水,自然挥干乙醚,分别得到挥发性成分48mg和96mg,做GC-MS分析。  2.3菌株与培养基耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methi

5、cillinsiltantstaphylococcus,MRS)由中国热带农业科学院热带生物技术研究所提供,大肠杆菌、普通金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌由海南大学公共实验中心微生物实验室提供。均采用牛肉膏蛋白胨培养基[2]:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,琼脂20g,定容至1L,pH7.0~7.2,1×105Pa灭菌20min。  2.4抑菌活性的测定[3]将胆木叶和茎挥发性成分配成浓度为100mg/ml的样品溶液,选用直径为5.5mm的灭菌滤纸片,滤纸片分别加样品溶液20μl,每个梯度重复3次,待溶剂挥干后,将已加样的滤纸片贴于

6、已涂供试菌悬液0.1ml(菌液浓度105~107cfu/ml)的琼脂培养基上,放置15min后,再放入培养箱37℃无光照培养,24h后测其抑菌圈大小。MRS以硫酸卡那霉素作为阳性对照,其它菌株以硫酸庆大霉素为对照。  3结果  3.1GC-MS分析结果  胆木叶挥发性成分共分离出18个峰,其中鉴定了14种化学成分,占胆木叶挥发性成分总量的95.75%;胆木茎挥发性成分共分离出14个峰,其中鉴定了10种化学成分,占胆木茎挥发性成分总量的88.31%,采用不做校正的峰面积归一化法得出各组分的相对含量,各色谱峰相应的质谱图检索采用NITS98标准质谱图库进

7、行检索。结果见表1。从表1可看出,胆木叶挥发性主要成分为烷烃、烷酸、烯烃、烯酸、酮和酯类,含量最高的为烷酸46.30%:十六烷酸41.02%和十八烷酸5.28%;胆木茎挥发性主要成分为烷酸、烯酸、烷烃、酸酐、酯和酮类,含量最高的为烯酸48.94%:(9E)-9-十六烯酸45.12%和9,12-十八烷二烯酸(Z,Z)3.82%。表1胆木叶和茎挥发性成分GC-MS分析结果(略)  胆木叶和茎中共有5种相同的成分:5,6,7,7a-四氢-4,4,7a-三甲基-2(4H)苯并呋喃酮、十六烷酸、十八烷酸、(9E)-9-十六烯酸、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯,其

8、中胆木叶中十六烷酸含量最高,胆木茎中十六烯酸含量最高。在胆木茎中无烯酸成分,胆木叶中无酸酐成分。据文献报道,

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