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1、HPLC法测定红霉素明胶微球的含量:伍善广杨帆潘育方黄慧李桃【摘要】目的建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为DIKMAC18色谱柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相为0.1mol/L磷酸二氢铵(三乙胺调节至pH6.5)乙腈(体积比67∶33),流速1mL/min;检测波长210nm。结果红霉素质量浓度在0.0992~0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999;平均回收率为100.1%,RSD=0.95%(n=9)。结论本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测
2、。【关键词】红霉素明胶微球;高效液相色谱法;紫外分光光度法Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminingthecontentoferythromycininthegelatinmicrospherescontainingerythromycin.MethodsDIKMAC18column(5μm,250mm×4.6mm)columnplebyusingthemobilephaseconsistingof0.1mol/Lammoniumdihydrogenphosph
3、ate(adjusttopH6.5ine)acetonitrile(67∶33).ThefloL·min-1andthedetection.ResultsThecalibrationcurveg·mL-1forerythromycin(r=0.9999).Therecoverythroughthecolumnethodissimple,rapidandaccurateforthecontentanalysisoferythromycininthegelatinmicrospheres.Keyycin;gelatinmicros
4、pheres;HPLC红霉素(erythromycin)是临床上应用广泛的抗生素,是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物[1],但在体内分布广泛,有效治疗浓度维持时间短,容易诱发耐药性,且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应[2]。红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体,是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球[3]。中国药典(2005年版)中红霉素的含量测定采用微生物检定法[4],此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等
5、[5-7]。本文曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量[5],取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量,并对2种方法进行统计分析,检验2种方法的差异性。1仪器与试药 岛津LC10ATVP高效液相色谱仪(SHIMADZUCOPRPORATION),紫外SPD10Avp检测器(SHIMADZUCOPRPORATION),HGMS,自制,批号:20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:DIKMAC18柱(5
6、μm,250mm×4.6mm);流动相:0.1mol/L磷酸二氢铵(三乙胺调节pH6.5)乙腈(体积比67∶33);流速1mL/min;检测波长:210nm。2.2溶液的配制 精密称取红霉素标准品49.6mg置50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为0.992mg/mL的标准品溶液。 精密称取红霉素明胶微球172.3mg(约相当于红霉素23mg),充分研磨,显微观察微球完全破坏后,置于容量瓶中加流动相至刻度,超声30min,放冷,用流动相定容至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,制成供试品溶液。精密称取空
7、白明胶微球172.4mg,充分研磨,按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。2.3系统适应性及方法专属性试验 在选定的色谱条件下,分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,结果见图1。红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1min,理论塔板数按红霉素计算不低于1000,与其他组分可基线分离,阴性样品不干扰样品测定。2.4标准曲线分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5mL置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取20μL进样,记录色谱峰峰面积。以峰面积(A)为横坐标,质量浓度(ρ)为纵坐标,绘制标准曲线,
8、回归方程为:ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2,r=0.9999。结果表明红霉素的质量浓度在0.0992~0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.7回收率试验 精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份,加入一定量的红霉素对照品,配制成