细胞工程实验指导书

《细胞工程实验指导书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、UNIVERSITY李国平贾小丽张剑胡永乐编生态与资源工程学院2013年8月20日目录目IJs1学生实验守则2实验一MS培养基的配制3实验二无菌操作及愈伤组织诱导技术9实验三植物器官分化的调控11实验叫试管苗的驯化、移栽和管理13实验五多倍体植株的诱导15生物工程是一门实践性较强的学科，在培养生物工程专业学生时耍特别注意学生实验能力的培养，尤其是专业基本操作。生物工程专业实验是生物工程专业教学实践的重耍环节，是实现专业教学目标的重要载体。通过专业实验，加强学生的专业理论基础，拓宽专业口径，培养学生综合运用不同学科领域的知识分析和解决实际问题的能力

2、，为培养生物工程专业具有自主创新能力的高素质、应用型人冰提供保障。《专、Ik.实验》是为生物工程专业本科高年级学生开设的综合实验课程，是在生物化学实验、微生物实验、细胞生物学、分子生物学和遗传学实验的基础上的综合实验课程。生物工程专业实验内容覆盖了生物工程的上、中、下游的全过程，包括了基因工程、植物细胞工程、天然产物的提取与分离鉴定技术等，使学生得到生物技术实验操作的全程、全方面训练，以提高学生的学习兴趣、动手能力和工作的责任心。由于生物技术的快速发展，加之我们是第一次这样系统地给学生开设生物工程大试验课程，许多工作还处于不断探索的过程中，难免有

3、不妥和疏漏之处，恳切期望读者提出宝贵意见，以利不断修正完善。学生实验守则一、自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室内安静，注意环境上生，不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。二、实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。三、爱护实验仪器设备，厉行节约。仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。四、实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。若需借用应办理借物手续。五、注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。六、实验结束，由实验指导教师和管理人

4、员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。实验一MS培养基的配制一、实验目的使学生了解植物组织培养MS培养基母液种类及组成；掌握MS培养其母液浓度的换算、配制、保存和注意事项；掌握完全培养基的配制及火菌方法，为植物愈伤组织诱导实验做好准备。二、实验原理植物离体组织器官可在人工合成的培养棊屮生长分化。用于植物离体培养的培养棊至少包括无机盐、糖类、其它有机化合物、生长调节剂，根据不同需要可添加其它附加成分。植物组织培养屮常用MS培养棊。培养棊制备之前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微

5、量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养棊配方需要量大若干倍的母液。当制备培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。已分装的培养棊要经高压蒸汽灭菌，检验无菌后备用。母液的配制是按所使用药品的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素、钙盐、镁盐和铁盐等。配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如Ca24和SO广,Ca'Mg2*和P0，一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。配制母液时耍用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都耍准确，各

6、种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。三、实验器具与药品①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml）、量筒（1000ml，100ml，25ml）、容量瓶（1000ml，500ml，100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、移液枪、pH计、高压灭菌锅。②试剂：配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质,2,4-D，NAA，6-BA等。实验按每2个学生一组，每组分配制培养基母液及激素母液一套，50mL量筒、1000mL有刻度烧杯、吸球、电炉各1个，5mL移液管

7、9支，50mL三角瓶20个。四、实验内容与操作步骤（一）MS培养基母液的配制首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。母液种类成分规定用量ml/L扩大倍数称取量mg母液定容体积ml配1LMS培养基吸取量mlKNO.s190038000NH4NO3165033000大量元素MgSO4-7H2O370207400100050KH2PO41703400CaCl2-2H2O4408800MnSO4-4H2O22.322300ZnSO4-7H2O8.68600H3BO36.2

8、6200微量元素KI0.83100083010001Na2MoC)4.2H2O0.25250CuSO4-5H2O0.02525CoC12