c型产气荚膜梭菌α

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1、C型产气荚膜梭菌α：韩学波，于欣，廖国玲，谢琴，曾瑾，王玉炯【摘要】　　目的研究含α-β2-β1融合基因的重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)的免疫原性。方法用重组菌株BL21(DE3)(pXETAB2B1)制备包涵体和全细胞培养物两种抗原，采用氢氧化铝胶体作为免疫佐剂，免疫ICR小白鼠，用C型产气荚膜梭菌外毒素粗提物进行攻毒，观察小鼠的保护情况。结果包涵体加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻毒均达到100%；全细胞培养物加氢氧化铝凝胶制备的抗原保护效果对于1LD100和2LD100的攻

2、毒达到50%和20%。结论已获得具有一定免疫原性重组菌株，可作为预防C型产气荚膜梭菌所致疾病的候选菌株。【关键词】C型产气荚膜梭菌融合蛋白免疫保护　　Abstract：ObjectiveToexploretheimmunogenicityofalphatoxin、beta2toxinandbeta1toxinfusiongeneintherebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)ofClostridiumperfringenstypeC.MethodsInclusionbodyandthestrainc

3、ultureofrebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)adeandthealuminumhydroxidehydrateandFreund'sadjuvantousemunizedperfringenstypeC.Immunogenicityoftherebinantstrainice.ResultsImmunizationinumhydroxidegelcouldprotectICRmousefromthechallengeof1LD100and2LD100.Theprotectiverateof

4、thestrainculturecontainingaluminumhydroxidegelthechallengeof1LD100and2LD100respectively；TheinclusionbodyandthestrainculturecontainingFreund'sadjuvantthechallengeof2LD100ofClostridiumperfingensCtypetoxin.ConclusionTherebinantstrainBL21(DE3)(pXETAB2BZ)hadimmunogenicity

5、andcouldbeusedascandidatestrainofvaccination.　　KeyperfringenstypeC；protectiveantigen；immunogenicityt　　C型产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，又称魏氏梭菌(C1L，完全混合均匀后双层纱布过滤2次，1.05×105Pa高压灭菌60min备用。　　1.4菌种的复壮　　在预先准备好的含50mg/mLKan的LB平板上，接种环划线冻存的BL21(DE3)(PXETAB2BZ)菌种，倒置于37℃培养箱中培养12～

6、16h后，挑取单个菌落，接种于含50mg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，于37℃振荡培养12～16h后备用。　　1.5免疫用抗原的制备　　1.5.1包涵体粗提物抗原的制备　　将IPTG诱导5h的50mL培养物离心收集菌体，然后重悬于0.5mL1%Tris-HCl-2mmol/LEDTA中，加入溶菌酶至终浓度100μg/mL，再加入0.5mL1%TritonX-100，于30℃温浴15min。超声波处理10s后再超声波处理10s，12000r/min离心15min，收集的沉淀物即为包涵体粗提物。将该包涵体重溶于20mL的生理盐水

7、中，超声波处理10s后再超声波处理10s，12000r/min离心15min，收集沉淀重溶于6mL的生理盐水中，分装于6支离心管中，备用。　　将制备的包涵体粗提物1支用灭菌生理盐水10倍稀释后，加入氢氧化铝凝胶至终浓度10%，经无菌检验后作为免疫用抗原。　　1.5.2重组菌全细胞培养物抗原的制备　　挑取LB平板的单个菌落，接种于5mL含30μg/mLKan的LB试管中，于37℃振荡过夜。次日取1mL接种于100mL含Kan的LB三角瓶中(1%接菌量)，于37℃振荡16～24h后加入0.8%甲醛灭活3d后，取50mL按10%加入氢

8、氧化铝凝胶佐剂，经无菌检验后作免疫用抗原。　　1.6免疫接种实验　　取小鼠50只，随机分成5组，每组10只(每组雌雄各5只)，第一组和第二组皮下注射用包涵体加铝胶制备的抗原(0.5mL)，第三组和第四组皮下注射含工程菌全细胞培养物加铝胶制备的抗原(0.5mL)，