实验1大肠杆菌的培养和分离

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1、实验1大肠杆菌的培养和分离高二年级班姓名学号：实验日期：_月円【知识准备】1.背景知识：大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）是微生物学和遗传学常用的实验材料，为单细胞原核生物，宽约0.5X1〜3微米；具有由肽聚糖组成的细胞壁；周身具鞭毛，能运动。大肠杆菌是在人和动物肠道中生活的、不会致病的正常栖居菌，但若进入胆囊、膀胱等处也会引起炎症。它能利用多种糖类物质产酸、产气，其代谢类型为异养兼性厌氧型；其代谢活动能产生大肠杆菌素（抑制肠道内其他分解蛋白质的微生物生长），还能合成维生素B和K。它们在肠道中大量繁殖，几乎占粪便干重的1/3。实验室中用于培养微生物

2、的营养物质称为培养基。按培养基的物理状态可分为：液体培养基和固体培养基。将已知的菌种引入新配制的培养基的过程称为接种。而在固体培养基表面用蘸有菌种的接种环连续划线，既可以达到接种的目的，乂可以实现分离菌种的目的。这是因为划线过程中接种环与培养基表血接触，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分细菌间的距离加大，经过培养后可出现由单个细菌细胞形成单菌落，这样就达到了分离细菌的冃的。2.实验原理：使用通用的细菌培养基（如LB液体培养基）可扩大培养人肠杆菌，使大肠杆菌迅速扩增。在LB固体平面培养基上对大肠杆菌进行划线分离，经培养后培养基上每一个菌体会形成一个单独的菌落。这是消

3、除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选突变菌株的最简便方法之一。为保证配制的培养基上只生长大肠杆菌，而不被其他微生物污染，实验过程屮耍进行无菌操作。1.思考题(1)为什么培养过程中会出现被其他微生物污染的现象？(2)进行了无菌操作是否肯定就不会出现被其他微生物污染的现象吗？(3)本实验的关键步骤一一划线分离的冃的是什么？(4)在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?在操作过程中应注意什么？【实验目的】1.利用液体培养基进行大肠杆菌的扩增2.用固体平面培养基进行大肠杆菌的划线分离3.了解微生物实验的操作原理和培养条件【材料用具】大肠杆菌菌种装有固

4、体培养基的、已灭菌培养皿；装有LB液体培养基的、己灭菌的250ml三角瓶封口膜和橡皮圈酒精灯接种环镊子装有酒精棉球的广口瓶恒温培养箱摇床【操作流程】【实验步骤】1.接种前的准备进行接种操作前，应先洗手，再用70%的洒精棉球擦拭双手和桌面。待酒精挥发之后，再点燃酒精灯。2.接种(1)接种时的要求接种过程要在酒精灯火焰附近完成，这是因为在火焰附近形成的上升气流能避免空气屮的微生物落入培养基屮。接种环灭菌：将接种环在酒精灯火焰的外焰灼烧灭菌。对金属丝与柄部连接部位也要在火焰上穿梭1一2次。灼烧后的接种环温度较高，为避免烫死菌种，可将其接触培养基或培养容器的内壁冷却后再取菌种。

5、(2)将固体培养基表面的大肠杆菌菌种转入液体培养基培养右手执接种环，在火焰上灭菌。用左手握住装宥菌种的试管和液体培养基的三角瓶靠近酒精灯火焰，并用右手中指-无名指夹不试管口的棉塞、无名指-小指夹下三角瓶的封口膜，将试管口和三角瓶口在酒精灯的火焰上烧灼灭菌后，再将接种环伸入试管，接触培养基冷却后取菌种。将菌种转入三角瓶的液体培养基中；分别将三角瓶的封口膜和试管的棉塞复原，在封口膜上标记好接种人和接种H期。(1)将液体培养基中的大肠杆菌菌种转入固体培养基中划线分离接种时应以左手持培养皿，在火焰旁用左手拇指、食指及中指使皿盖开启成一缝（培养皿盖不能开大，以避免杂菌落入），用灭

6、菌过的接种环取少许菌种迅速送入培养皿内，在固体培养基的表妞连续平行划线4.一5条，将培养皿转动一定角度后，用接种环通过第1...次划线的末端部分做第2次连续平行划线，然后再以同样方法依次操作。（见右图）划线时接种环应与培养基表面成30°左厶，注意划线要轻，不可把培养基划破，也不要使接种环碰到培养皿边缘。（见右下图）21.培养（1）将接有菌种和液体培养基的三角瓶在摇床上振荡培养12h,温度控制在37°C左厶。（2）将划线后的同体培养基盖好，在培养皿盖上标记好接种人和接种曰期，再将培养皿在37°C恒温培养箱中倒置培养12-24ho倒置培养的原因是：恒温培养时，培养基中的水分

7、会以水蒸气的形式蒸发，并在培养皿盖子内凝结成水滴，水滴如果滴落在培养基表面并扩散开来，则会使不同菌落中的菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分离目的。培养12—24h后，若在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌种已被分离。【实验记彔】请课代表将在37°C恒温培养箱中培养12—24h的培养结果用相机拍摄下来，传给任课教师。【结果分析】1.你的培养基上是否有杂种污染？如何判断？2.用液体培养基与用固体培养基培养时有什么不同？原因是什么？【创新空间】你对于本实验的过程和结果有何疑问？对于实验步骤有何改进建议？检査人:请将它们写在这里，我们将共