实验1 大肠杆菌的培养和分离.doc

《实验1 大肠杆菌的培养和分离.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、选修一实验1大肠杆菌的培养和分离一、知识要点：1.微生物是指结构简单、形体微小的的低等生物，包括。细菌是单细胞的原核生物，有、、,,只有一O以的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和两大类，区别在不同。大肠杆菌是（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。2.细菌的分离方法有两种：和o是的通用方法，也是用于的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液,细菌也O划线最后，可使细菌间的O将接种后的固体培养基后,细菌细胞就会繁殖成许多

2、细菌细胞，形成，不会O在划线，则每个斜面的菌群就是有产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得的菌株。由于工程菌的（如抗氨节青霉素基因），如在培养基中加入,由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后的工程菌能生存下來。涂布分离时，需要先将培养的，通常稀释到10乍〜10-7之间,然后去0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的上，用涂布在上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上后，再做功能性实验。划线分离法;涂布分离法，但操作复杂。3.在培养微生

3、物时，必须进行o其首要条件是必须是无菌的，也必须是无菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都耍做到无菌（防止杂菌污染）。进行恒温培养时，要将,是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使后,落入,菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见相互影响，很难在分成单菌落，O其培养过程一般包括：培养基、、、等几步。4.细菌扩大培养要用（含有蛋白腺、酵母提取物、氯化钠、水等物质。通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业），划线分离要用（常用于微生物、、和）。“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用来配制，还要加入

4、一定的,以维持一定的;毒菌培养基一般用配制或即可。尽管培养基的配方各不相同,但其都_样（五类）C配制过程是:、、、等几步。二、课后练习1.（09调研卷）某生物实验室要进行大肠杆菌的培养和分离及植物组织培养实验。现有以下几种试剂供实验用•生长素溶液B.脱落酸溶液C.秋水仙素溶液D.琼脂E.细胞分裂素溶液F.赤霉素溶液请在标有序号的空白处填空，并将序号及相应答案写在答题纸上：（1）大肠杆菌的培养和分离实验中，先用LB进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的上述试剂是o在培养基上完成接种后，需

5、将培养皿倒置，目的是，然后置于恒温箱中培养。（2）用MS培养基进行植物组织培养实验的基本过程：植物细胞一愈伤组织〜从状苗一试管苗。若用成熟花粉培养得到的试管苗植株。以上过程需要加入上述试剂中的两种物质刺激，且不同的培养时期这两种物质的比例不相同，当其屮的浓度较高时主要是促使其长芽。愈伤组织中细胞的分裂方式是,愈伤组织小的一部分细胞长成根，而另一部分细胞却长成芽，原因是细胞发生了分化，实质是C（3）MS培养基和LB培养基配制好后都需耍进行、分装和灭菌处理。2.2005年诺贝尔生理学或医学奖授予两位澳大利亚的医生马歇尔和沃伦，以表彰他们发现幽

6、门螺杆菌及其在胃炎等病中所起的作用。（1）1974年沃伦在一份胃粘膜活体标本中发现无数的细菌紧贴着胃粘膜上皮，这种细菌就是幽门螺杆菌，胃粘膜上皮细胞与细菌细胞结构相比主要区别、（2）不同微生物有各自得代谢特点，人们常据此分离鉴别微生物的种类。实验室有两个菌种：胱氮酸倚赖型细菌（无胱氮酸不能生长），甲基营养细胞（只能利用甲醇.甲烷作碳源）,但试管上标签脱落。某同学的鉴别思路是配制3个培养基，只接种其中的任一菌种，根据生长状况将其鉴别出来，另一种自然鉴别出来。请根据这一思路完成实验方案。实验步骤：第一步：在两个菌种的试管上分别标记A.B第二步

7、：不含有胱氨酸和甲基营养物的培养基，分别倒入3个培养皿中，标上1、2、3,第三步：结果分析：（3）第二步中倒平板及对菌种纯化的说法正确的是（）儿倒平板时左手将灭过菌的培养皿盖打开，右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养1111盖B.使用己灭菌的接种环，培养基不需要再灭菌C.稀释涂布平板时要将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面D.涂布器用火焰灼烧灭菌1.《大肠杆菌的培养和分离》实验前，所用的三角瓶口或试管口都要先塞上棉塞，理由是,再经高压蒸汽灭菌才能使用。制作合格的棉塞的标准是。在配制培养基时，除考虑无菌外,一般要测,

8、大肠杆菌要求在的环境下培养。配制LI3固体培养基时，应在的培养基中，加入。将上述培养基分别加到三角瓶、试管或培养皿中时，应用，并注意,否则o制作斜面培养基时，其斜面长度应不超过于试管长度的为宜