染色体结构显示和检测方法

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1、染色体结构显示和检测方法　　显Q带法　　1.漂洗：取经过干热预处理或已老化的染色体标本，置于缓冲液中浸5~10分钟。　　2.染色：浸入的GM或QD染液中5~10分钟。　　3.漂洗：浸入新鲜缓冲液中漂洗两次，每次5分钟。　　4.观察：向标本染色体面滴1~2滴新鲜缓冲液，覆以盖片，置荧光显微镜下观察。　　显G带法　　胰酶-Giemsa混合显带法　　1．预处理：取中期染色体标本，置60℃～60℃温箱中20～30分钟，或在37℃温箱过夜，然后浸入磷酸缓冲液中，，56℃温浴10分钟。　　2．消化和染色：用现配制的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10～30分钟，混合液按如下

2、比例配制：　　M磷酸缓冲液ml　　甲醇ml　　Giemsa干粉mg　　%胰酶～染色体结构显示和检测方法　　显Q带法　　1.漂洗：取经过干热预处理或已老化的染色体标本，置于缓冲液中浸5~10分钟。　　2.染色：浸入的GM或QD染液中5~10分钟。　　3.漂洗：浸入新鲜缓冲液中漂洗两次，每次5分钟。　　4.观察：向标本染色体面滴1~2滴新鲜缓冲液，覆以盖片，置荧光显微镜下观察。　　显G带法　　胰酶-Giemsa混合显带法　　1．预处理：取中期染色体标本，置60℃～60℃温箱中20～30分钟，或在37℃温箱过夜，然后浸入磷酸缓冲液中，，56℃温浴10分钟。　　2．消化和染色

3、：用现配制的胰蛋白酶-Giemsa混合液消化和染色10～30分钟，混合液按如下比例配制：　　M磷酸缓冲液ml　　甲醇ml　　Giemsa干粉mg　　%胰酶～ml　　3．封片：染色后用自来水冲洗，入蒸馏水漂洗数次、晾干、二甲苯透明2~3分钟，封入中性树脂中。　　Giemsa显带法　　1．预处理：将标本置入60~80℃温箱或烤箱中20~30分钟，亦可在37℃温箱过夜。　　2．胰酶消化：用%的NaCl配制%胰蛋白酶溶液消化3~5分钟。　　3．染色：取出标本片，先直立于吸水纸上除去多余胰酶液后，随即置入Giemsa染液中，染10分钟。　　4．封片：自来水洗，蒸馏水漂洗，晾干，

4、二甲苯透明2~3分钟，封入中性树胶中。　　BUdR掺入和制片程序　　1．BUdR培养液制备：先制备好含BUdR的培养液。　　2．BUdR掺入：如用传代细胞，在末次传代后，改换用含BUdR的培养液培养。如为人末梢血细胞，一开始就用含BUdR培养液培养37℃温箱内培养。　　3．中止掺入与制片：待细胞经历两个细胞周期　　4．加秋水仙素—制片。　　姐妹染色单体分化染色　　方法一　　1．老化：中期染色体标本老化1~2天。　　2．预处理：放入预热至85~89℃的1MNaH2PO4处理15分钟。　　3．制片：然后用温蒸馏水轻轻漂洗，蒸馏水冲洗，晾干，Giemsa液染色10分钟，晾干

5、，二甲苯透明，封固。　　方法二：即FPG法　　1．标本：掺入BUdR后的中期染色体标本。　　2．荧光染色：用荧光染料Hoechst33258染色12~15分钟。　　3．黑光灯照射：自来水冲洗，加1滴缓冲液，覆以盖片，用黑光灯照射，距离5厘米，时间半小时。　　4．温浴：50~60℃热的2×SSC液温育2小时，蒸馏水冲洗，晾干。　　5．染色：的2%Giemsa染色15分钟，透明封固。　　方法三　　1．标本：掺入BUdR后的中期染色体标本，置30瓦日光灯下，灯距3厘米，照射6小时。　　2．温浴：用2×SSC液处理15分钟。　　3．Giemsa染色10分钟，也可获得满意的标本

6、。　　为提高检出率，可采取以下措施：　　1．在培养时把血清量降到5%.　　2．用不含叶酸的MEM-Fra培养基培养。　　3．PH调至　　方法一：　　1．采血：静脉采血，肝素抗凝，用小方瓶培养，加培养液5ml.培养液租成为：含20%小牛血清的Eagle液，加PHA40微克/毫升。　　2．培养：置37℃温箱内培养48或72小时，以1000rpm离心8分钟。　　3．固定：3：1甲醇/冰醋酸固定3次，每次15分钟，离心沉淀固定液。　　4．制片：冷冻载片滴片法制片，自然干燥，10%Giemsa染色15分钟。　　方法二　　1．采血：肝素抗凝血~，置10ml试管中，加入血量一半的%

7、甲基纤维素，充分混合。　　2．培养：置37℃温箱中静置培养30分钟，以2000rpm离心10分钟，去上清液。　　3．制片：做涂片，Wright法染色。　　方法三　　1．采血：用三棱针刺无名指取血，立即注入内径3mm，长5cm的血液沉淀管中，用小玻璃棒搅拌除去纤维蛋白。　　2．加明胶：加入3%的明胶，小心混匀，置37℃温箱自然沉降50分钟。　　3．吸去上清液，离心，沉淀物涂片，自然干燥，Wright染色30分钟，再用Giemsa染色2分钟。　　放射自显影UDS的测定：　　1．细胞培养：WI-38成纤维细胞，完全培养液支持物盖片培养法培养，细胞生长至汇合