实验1微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色课件

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1、实验一显微镜油镜的使用与保护细菌形态结构的观察细菌的革兰氏染色实验目的1）掌握显微镜油镜的使用和保护法2）认识细菌的基本形态与特殊结构。3）掌握细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法的步骤、细菌的革兰氏染色结果。4）学习无菌操作技术实验内容：1）显微镜油镜的使用方法；2）观察细菌基本形态的染色装片；3）观察几种常见细菌菌落；4）进行革兰氏染色法的操作实验原理显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，影响显微镜的分辨率。显微镜物镜中的油镜放大倍数最大，可达100X,油镜使用需在载玻片与镜头之间滴加镜油（香柏油）。油镜的基本原理总放大倍数(物镜放大倍数x目镜放大倍数)物镜

2、的数值孔径NANA=n•sinn是指介质（空气、浸油等）的折射率；是孔径角的一半。分辨率显微镜所能分辨的两点之间的距离分辨率＝/2×N.A.=/2×n•sin（为所使用的光线的波长）油镜的分辨率为0.2µm左右油镜的使用增加照明亮度油镜头焦距很短，直径很小，所需光照强度最大增加显微镜的分辨率显微镜性能的优劣主要决定其分辨率的大小。为什么使用香柏油？当物镜与装片间的介质是空气（空气折射率n=1.0）时，光线会发生折射，使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度。当介质为香柏油时，香柏油的折射率（1.52）与玻璃相近，光线可经过载片直接进入物镜而不发生折

3、射，增加了照明度，更重要的是增加了数值孔径达到提高分辨率的目的。显微镜使用方法显微镜各部分名称油镜的维护与保养透镜的清洁用无水乙醇和无水乙醚（3:7/4:6）擦拭镜头。尤其是用完油镜后。干燥防止生霉目的要求巩固显微镜油镜的使用方法认识细菌的基本形态和特殊结构观察并描绘几种常见微生物的基本形态与特殊结构微生物形态观察实验仪器、材料和用具显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液细菌装片：细菌三种基本形态装片及细菌特殊结构-芽孢、鞭毛、荚膜装片。细菌基本形态观察（1）观察金黄色葡萄球菌、八叠球菌装片。注意菌体间的关系。（2）观察枯草芽孢杆菌、大肠杆菌装片。（3）观察螺菌装片。注

4、意菌体的螺旋。细菌的基本形态ArrangementofCocci球菌A.arrangementofcocciB.staphylococcusarrangementC.streptococcusarrangementD.sarcinaarrangementE.diplococcusarrangementArrangementsofBacilli牙孢杆菌A.arrangementsofbacilliB.singlebacillusC.streptobacillusSpiralFormsA.spiralformsB.spirillumC.spirochete(arr

5、ows)mixedwithredbloodcellsD.vibrio细菌特殊结构观察（1）固氮菌（荚膜）装片：注意菌体和荚膜的染色差异，荚膜的大小、以及与菌体的关系。（2）螺菌（鞭毛）装片：注意鞭毛的染色、位置、数目、形状和大小。（3）巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破伤风梭菌装片，注意孢体和菌体的染色差异，芽孢的形状、大小和位置。CapsulestainofEnterobacteraerogenes细菌荚膜细菌的鞭毛arrangementofflagella鞭毛细菌芽孢目的要求掌握细菌涂片标本的制备方法及革兰氏染色法的步骤识别细菌的革兰氏染色结果学习无菌操作技术

6、细菌革兰氏染色实验仪器、材料和用具(1)显微镜、镜油、擦镜纸、擦镜液(2)结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液(3)载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、(4)枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌液体培养液、牙垢实验原理实验步骤涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中;干燥在空气中自然干燥用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过三次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.固定3.95%的乙醇脱色：滴加95%的乙醇，轻轻摇动玻片进

7、行脱色，直至流出的乙醇无紫色时，水洗；染色步骤1.结晶紫初染：滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上，染色1分钟，水洗；2.卢戈氏碘液媒染：用卢戈氏碘液覆盖涂片1分钟，水洗；4.蕃红复染：滴加蕃红染液复染2分钟以上，水洗，吸干镜检。载玻片上滴加一滴香柏油，放油镜下镜检;注意标本中细菌的形态、大小,排列,和颜色镜检染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色;革兰氏阴性菌呈红色;金黄色葡萄球菌的染色结果讨论记录革兰氏染色结果,并描述形状,菌体排列和颜色,看看与理论上是否相同;如不同,分析原因;分析影响革兰氏染色结果的因素;牙垢里大概能看到几类菌，哪几种较多？注意事项载玻片是否干净,取菌

8、量、合适的菌龄、热固定及每一步水洗和酒