荔枝霜疫霉病病原菌鉴定和生物学特性研究

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1、荔枝霜疫霉病病原菌鉴定及生物学特性研究荔枝霜疫霉病(PeronophythoraLitchiChenetal.)是目前荔枝生产上的重要病害之一[1~2]，严重影响荔枝品质、产量以及鲜果的贮运和外销。发病初期果皮表面出现褐色或黑色的不规则病斑，后来迅速扩展蔓延至全果变黑，果肉腐烂，有酸味和酒味，并流出褐色汁液，病害发生至中后期，病部表面长出白色霜霉状物。叶片受害后出现褪绿斑块，以后病斑扩大成为不规则的黄绿色斑块；空气湿度大时，病部会长出白色霜霉状物[3]。该病在广东、广西、福建、海南、台湾均有发生，不仅严重危害接近成熟的果实，也危害嫩梢、叶片、花穗、结果

2、小枝、果柄及幼果，引起大量落花、落果、裂果和烂果，产量损失可达30%～80%[4~5]。本文对荔枝霜疫霉病原菌的生物学特性的研究为有效地防治病害、降低产量损失等提供理论依据。1材料和方法1.1病原来源从海南省澄迈县永发镇采集荔枝霜疫霉病病果，组织分离获得菌株，进行单孢分离纯化菌种并将纯化后的菌种保存在PDA斜面上待用。1.2病原菌致病性测定无菌条件下，将菌饼接种到健康无病的荔枝叶片，保湿24h，设接种清水为对照，重复3次。1.3病原菌的分离鉴定及培养性状27℃下在PDA平板上对病菌纯化培养，对菌落形态特征和病原菌形态特征进行观测及记录。1.4病原菌生物

3、学特性测定1.4.1温度对菌丝生长的影响将菌饼移至PDA平板中央，分别置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、27℃、30℃和35℃共8个梯度的恒温培养箱中培养4d和7d后，测量菌落的直径。每处理3个平板，重复3次（下同）。1.4.2pH对菌丝生长的影响用1mol/L的HCl和NaOH调节PDA培养基的pH值，使之分别为3、4、5、6、7、8、9、10、11和12共10个梯度。将菌饼移至pH梯度培养基平板中央，27℃的恒温箱中培养4d和7d后，测量菌落的直径。1.4.3碳源对菌丝生长的影响6用等量的蔗糖、麦芽糖、乳糖、山梨醇、甘露醇、D-果糖、D-半

4、乳糖、可溶性淀粉、甘油和L-阿拉伯糖共10种碳源分别与PDA培养基中的葡萄糖等量置换，配制成不同碳源的培养基，将菌饼接种在培养基平板中央，置27℃的恒温箱中，培养4d和7d后，测量菌落的直径。1.4.4氮源对菌丝生长的影响用等量的甘氨酸、酵母浸膏、L-组氨酸、草氨酸、硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、牛肉浸膏、蛋白胨和尿素共10种氮源分别与Czapek培养基中硝酸钠等量置换，配成不同氮源的培养基。将菌饼移至培养基平板中央，置于27℃的恒温箱中，培养4d和7d后，测量菌落的直径。1.4.5光照对菌丝生长的影响将菌饼移至PDA平板中央，置于完全黑暗、12h光暗交替和

5、完全光照3个处理条件下，于27℃恒温培养箱中培养4d和7d后，测量菌落的直径。1.4.6致死温度和时间的测定于45℃、50℃、55℃、60℃、恒温水浴锅中的试管内加入1ml孢子悬浮液，处理5min、10min、15min、20min、25min、30min后迅速冷却，将孢子悬浮液滴于载玻片上保湿培养12h后观察，镜检孢子萌发情况。2结果和分析2.1致病性测定结果通过对致病性测定观察可见，在健康的荔枝果上产生了明显的病原菌菌丝，取其病原菌在显微镜下观察，发现病原菌与原分离培养的荔枝霜疫霉菌菌落、孢囊梗、孢子囊相同，根据柯氏法则，确定了该病菌对荔枝的致病性

6、。如图1图1荔枝霜疫霉菌病原菌接种健康果和叶产生的病症2.2病原菌的分离鉴定及培养性状菌落形态：PDA平板上菌落突起，高1～2mm，菌丝絮状，白色质密，边缘整齐（如图2）。病原菌形态：6孢囊梗直立，双分叉锐角分枝，前端逐渐变细；孢子囊柠檬形、椭圆形，无色至淡褐色，顶端有明显的乳突，可直接萌发或间接萌发，直接萌发产生芽管，间接萌发产生游动孢子，一个孢子囊可产生5～14个游动孢子，多为6～8个；游动孢子肾脏形，侧生双鞭毛。根据观测得到的病原菌形态特征，查阅有关文献后，可初步确定此菌为荔枝霜疫霉菌[6~7]。菌落形态孢囊梗及孢子囊图2荔枝霜疫霉病菌2.3温度

7、对菌丝生长的影响菌丝在10～30℃范围内均可生长，适宜温度为20～30℃，最适温度为27℃，10～15℃菌丝生长缓慢，5℃和35℃菌丝停止生长（见图3）。图3温度对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响Fig.3Effectoftemperatureonmycelialgrowthofperonophythoraceaelitchi2.4PH对菌丝生长的影响菌丝在pH3~12均能生长，适宜pH为4~8，最适pH为6，pH大于8时，对菌丝生长有抑制作用，说明酸性条件适合菌丝生长（见图4）6图4pH对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响Fig.4Effectoftemperatur

8、eonmycelialgrowthofperonophythoraceaelitchi2.5碳