高效液相色谱法测定蛹虫草子实体中腺苷的含量

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1、高效液相色谱法测定蛹虫草子实体中腺苷的含量【摘要】目的建立测定蛹虫草子实体中腺苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相:水甲醇（体积比85∶15），流速:1.2mL/min；检测波长:260nm。结果腺苷平均加样回收率为100.23％，RSD=1.43%。结论该方法简便、准确，适用于该产品质量检验分析。【关键词】高效液相色谱法；蛹虫草子实体；腺苷　　Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforcontentdeterminationofadenosininCordycep

2、smilitaris(L.)Link.MethodsSamplesonslTMC18column(4.6mm×250mm,5μm)byusingethanol(85∶15)asmobilephase.Thedetection.ResultsTheaveragerecoveryofadenosineethodissimple,accurate,ilitaris(L.)Link.　　Keyilitaris(L.)Link;adenosine　　蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草)子实体为麦角菌科虫草属真菌蛹草菌Cordyceps.militaris(L.)Link.的干燥子座,是虫草属的模式种

3、，也是与冬虫夏草极为相似的种。　　研究资料表明，蛹虫草子实体的活性成分与野生冬虫夏草类似，含有多量的虫草素、腺苷、腺嘌呤、虫草酸、虫草多糖等〔1-3〕。有文献报道，腺苷可减少心肌漏出酶,维持细胞膜的完整性并降低冠脉阻力,对心肌有一定的保护作用〔4-6〕。目前，蛹虫草子实体的质量多以测定其多糖的含量作为控制标准，多糖测定使用硫酸酚法，操作误差大，条件不易把握。鉴于腺苷为蛹虫草中的活性成分之一,本文采用高效液相色谱法测定了蛹虫草子实体中腺苷的含量,方法灵敏，结果准确可靠。　　1仪器与材料　　1.1仪器　　日本岛津高效液相色谱仪ClassLCIOA型，SPD10A紫外检测器，N2000色

4、谱工作站；sartoriusBS423S型电子天平；超声波清洗器(天津恒奥超声波清洗器)。　　1.2材料　　腺苷对照品（中国药品生物制品检定所检定，批号：879200102）；蛹虫草子实体，购于江门市新会会城汇康虫草制品厂；甲醇为色谱纯；水为双蒸水。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱DiamonsilTMC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：水甲醇（体积比85∶15）为流动相。流速1.2mL/min；检测波长：260nm；进样量：20μL；柱温：室温25℃。　　2.2对照品溶液的制备　　　　精密称取干燥至恒重的腺苷对照品10mg，置

5、50mL容量瓶中，加体积分数为90%的甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL中含0.2mg对照品的溶液，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备　　　　称取蛹虫草子实体样品适量，粉碎，过2号筛，备用。精密称取10g供试品粉末，置500mL圆底烧瓶内，加入体积分数为50%的乙醇水溶液100mL，置沸水浴中回流提取1h，取出过滤，共提取3次，滤液合并后蒸干，加体积分数为50％的甲醇溶解定容至100mL容量瓶，摇匀，经0.45μm微孔滤膜压滤，得供试品溶液。　　2.4最大吸收波长的选择　　　　取腺苷对照品和供试品溶液适量，加体积分数为90%的甲醇溶解，用紫外—可见分光光度计于200～400nm波长

6、范围扫描。腺苷对照品和供试品溶液均在260nm处有最大吸收。结果同《中国药典》中“冬虫夏草”腺苷的最大吸收波长一致。因此确定测定波长为260nm。　　2.5线性关系的考察　　精密吸取0.4，0.5，0.6，0.8，1.0mL的腺苷对照品溶液（每1mL中含0.2mg对照品），分别置10mL的容量瓶中，用体积分数为90％的甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪(进样量20μL)。以质量浓度为横坐标(ρ,mg/mL),峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线。经回归处理后得标准曲线：A＝704720ρ＋98845（R2=0.9996），说明腺苷在82.56～206

7、.4μg范围内线性关系良好。　　2.6精密度试验　　　　取16μg/mL的对照品溶液，每次进样20μL，连续进样5次，测定峰面积，腺苷峰面积RSD为0.41%（n=5）。　　2.7稳定性试验　　　　精密吸取供试品溶液20μL，分别于放置0、2、4、6、8h进样测定，结果供试品溶液在8h内峰面积无明显变化，峰面积RSD为0.66%。　　2.8加样回收率试验　　采用加样回收法,取已知含量的同一批供试品粉末约10g,共5份，分别精密称定，置圆底烧瓶中